黄瓜离体叶绿体转化方法
王宏刚 白艳玲* 张文娟 刘盛海 王 勇 徐海津 张秀明 乔明强
南开大学生命科学学院, 天津 300071
摘要 : 叶绿体是植物细胞内执行光合作用的半自主性细胞器, 叶绿体转基因是研究叶绿体基因表达调控机制的重要技术。通常在细胞和组织水平进行转化时需要叶绿体同质化, 因此实验周期较长。该文以无菌培养的黄瓜绿色子叶为材料, 通过差速离心分离叶绿体, 以0.33 mol/L山梨醇为叶绿体洗涤和悬液, 在13 kV/cm电击电压条件下进行转化。经PCR、RT-PCR鉴定和荧光显微镜观察, 证明外源基因能导入离体叶绿体并可进行表达。该方法有望为包括鉴定叶绿体表达载体功能等基础性研究工作提供快捷途径。
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