采用RNA干扰方法特异性降低胚胎干细胞中Nanog的表达

摘要 : 胚胎干细胞是从内细胞团分离得到的一群具有多向分化潜能和自我更新能力的细胞， 发育上的全能性赋予其在临床上广泛的应用前景。对胚胎干细胞全能性机制的研究是其在临床上得以应用的前提和基础。Nanog在胚胎干细胞全能性的维持中起着至关重要的作用， 为了更详尽地研究Nanog在胚胎干细胞全能性维持中的作用， 我们采用RNA干扰的方法， 特异性地降低胚胎干细胞中Nanog的表达， 并观察伴随Nanog的表达下降J1细胞的变化。在本试验中， 我们设计合成了四条针对Nanog的干扰片段， 转染J1细胞， 利用RT-PCR、Real-Time PCR、Western印迹检测各个片段对J1细胞中Nanog表达的影响。结果显示， Nanog-P1对J1细胞中Nanog的干扰效率可达90%以上。Nanog表达下降后J1细胞中全能性相关基因utf1的表达显著降低， 而分化相关基因gata6的表达有明显升高， 说明Nanog在胚胎干细胞的全能性维持中起重要作用。