Poly d(GC)在负超螺旋下形成的Z-DNA

摘要 : 为建立一个生理状态下的左旋DNA (Z-DNA)模型， 本文以pMD18-T质粒为母本质粒， 将含有d(GC)₆、d(GC)₈、d(GC) ₁₀、d(GC)₁₃等poly d(GC)片段的特殊序列插入到pMD18-T质粒中， 构建了poly d(GC)重组质粒。这些poly d(GC)重组质粒处于负超螺旋状态。甲基化抑制实验证实， 这些插入到质粒中的poly d(GC)能够形成潜在的Z-DNA构象。同时， 为进一步验证poly d(GC)重复的长度与形成Z-DNA效率的关系， 原核表达并亲和层析纯化了鲫鱼PKZ Za多肽(P_Za)。凝胶阻滞实验分析了d(GC) ₆、d(GC)₈、d(GC)₁₀、d(GC) ₁₃ 4种重组质粒与P_Za的亲和性。结果显示， P_Za对这4种重组质粒的迁移都能产生阻滞效应， 并且随着GC的增多， 阻滞效应越明显。说明d(GC)越多， poly d(GC)形成Z-DNA的能力越强。