Rho/Rho激酶通路在5-羟色胺诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖中的作用

摘要 : 探讨Rho/Rho激酶通路在5-羟色胺(5-HT)诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖中的作用。采用细胞培养、噻唑蓝(MTT)比色法、蛋白质免疫印迹(Western blot)以及反转录聚合酶联反应(RT-PCR)等方法， 研究不同浓度5-HT (0.01、0.1、1和10 mmol/L)处理24 h后， 大鼠PASMCs的增殖程度、增殖细胞核抗原(PCNA)的表达变化以及Rho激酶抑制剂法舒地尔对1 mmol/L 5-HT诱导的PASMCs增殖的影响， 并通过检测Rho激酶(ROCK1) mRNA表达及肌球蛋白磷酸酶目标亚单位1 (MYPT1)磷酸化水平反映1 mmol/L 5-HT作用不同时间Rho激酶的表达及活化程度。结果显示， 在0.01~10 mmol/L浓度范围内， 5-HT可明显诱导大鼠PASMCs增殖(P< 0.05或P<0.01)， 还可浓度依赖性地上调PCNA的表达(P<0.05或P <0.01)。1 mmol/L 5-HT作用后明显诱导大鼠PASMCs中MYPT1磷酸化水平， 在15 min时磷酸化水平达最高(P<0.01)， 也明显诱导了ROCK1 mRNA表达升高， 在30 min时表达水平达最高(P<0.01)。Rho激酶抑制剂法舒地尔明显抑制了1 mmol/L5-HT诱导的PASMCs的增殖。结果表明5-HT明显诱导了大鼠PASMCs中Rho激酶的表达及激活， 法舒地尔对5-HT诱导的PASMCs的增殖有明显的抑制作用。说明Rho/Rho激酶在 5-HT诱导的大鼠PASMCs增殖中起重要作用。