杂色曲霉素诱导胃黏膜上皮细胞细胞周期G₂期阻滞

摘要 : 探讨杂色曲霉素(sterigmatocystin， ST)对体外培养的永生化胃黏膜上皮细胞GES-1细胞周期的影响及细胞周期蛋白D1、真核起始因子eIF4E和其结合蛋白4E-BP1在ST诱导细胞周期变化中的可能作用。采用细胞培养、噻唑蓝(MTT)比色法、流式细胞定量检测(FCM)、吉姆萨(Giemsa)染色、蛋白质免疫印迹(Western 印迹)以及反转录聚合酶联反应(RT-PCR)等方法， 研究不同浓度(100、500、1 000、2 000 μg/L) ST处理24 h后， GES-1细胞的增殖、细胞周期分布及eIF4E、4E-BP1及细胞周期蛋白D1表达的变化情况。MTT法检测结果显示， ST可明显抑制GES-1细胞的增殖， ST 100、500、1 000、2 000 μg/L处理组的增殖抑制率分别为12.76%、16.35%、21.65%和32.06%。FCM检测结果显示， 给予500、1 000和2 000 μg/L ST处理24 h可剂量依赖性提高G₂/M期细胞比例。吉姆萨染色结果表明， 在0~2 000 μg/L的剂量范围内随ST剂量增高， 细胞分裂指数逐渐降低， 提示ST可诱导胃黏膜上皮细胞周期发生G₂期阻滞。Western印迹分析结果显示， 在0~2000 μg/L浓度范围内， ST可剂量依赖性地上调eIF4E和4E-BP1在蛋白质水平上的表达(eIF4E: r=0.844， P<0.01; 4E-BP1: r=0.930， P<0.01)， 而降低eIF4E和4E-BP1的磷酸化水平(peIF4E: r=-0.663， P<0.01; p4E-BP1: r=-0.656， P<0.01); 同时使细胞周期蛋白D1的表达下降(r=-0.559， P< 0.05)。RT-PCR检测在mRNA水平进一步证实了ST对eIF4E和4E-BP1表达的影响。研究结果表明， ST可抑制体外培养永生化胃黏膜上皮细胞增殖， 诱导细胞发生G₂期阻滞， 4E-BP1表达升高， 而eIF4E和4E-BP1的磷酸化水平降低及细胞周期蛋白D1表达下降可能是ST抑制胃黏膜上皮细胞增殖， 诱导周期分布变化的重要机制。

CSTR: 32200.14.cjcb.2009.01.0016