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人骨髓基质细胞体外分离及定向培养内皮细胞


冯　滨*　刘迎龙　冯　凯1　陈　虎 1　龚　茹2
中国医学科学院、中国协和医科大学阜外心血管病医院外科, 北京 100037；1军事医学科学院附属医院全军造血干细胞移植中心, 北京 100039；2第三军医大学成都军医学院, 成都 610083
摘要 : 用Ficoll(比重1.077 g/ml)从正常成人骨髓中分离骨髓基质细胞(BMSCs)，DMEM-HG 培养基内含20%FBS、GM-CSF(100 u/ml)、VEGF(10 ng/ml)、FGF(5 ng/ml)、L-谷氨酰胺(2 mmol/L)、肝素(90 u/ml)，以及抗生素液进行定向培养和扩增其中的内皮细胞(ECs)，VIII因子相关抗原 的免疫组化法和透射电镜观察(TEM)鉴定其细胞的性质。结果5.0 ?05个BMSCs在体外经定向ECs培养和扩增8代后，获得了6.0 ?09个ECs，扩增了约1.2?04倍。70%~80%的细胞对VIII因子相 关抗原免疫组化呈阳性反应；光镜下细胞呈典型的“鹅卵石”样; TEM下可观察到胞浆内有Weible-palade小体，证实为内皮细胞。实验表明，BMSCs在体外分离和定向培养的ECs，经扩增后可能 是心血管组织工程所需种子细胞的又一个重要来源。