雌雄昆明小鼠脂肪间充质基质细胞分离培养、鉴定及差异性
刘钰轩 李静阳 董恒源 夏明洋 张莉*
该研究探究昆明小鼠脂肪间充质基质细胞(adipose-derived mesenchymal stromal cells,AD-MSCs)的分离、培养、鉴定方法及不同性别的生物学特性差异。该研究采用酶消化法在无菌条件下获取昆明小鼠AD-MSCs进行原代培养, 观察细胞形态, 检测P4、P8、P12、P16细胞生长曲线,采用免疫荧光与流式细胞术检测细胞表面标志物(CD29、CD31、CD34、CD44、CD45、CD90)的表达情况, 进行成脂、成骨和成软骨诱导检测多向分化能力同时量化诱导阳性率, 并检测衰老情况。该研究成功分离获得呈梭形、纺锤形或多角形贴壁生长的AD-MSCs, 细胞生长曲线呈典型的“S”型; P4、P8、P16雌性昆明小鼠脂肪间充质基质细胞(adipose-derived mesenchymal stromalcells from female Kunming mice, AD-MSCs-F)、雄性昆明小鼠脂肪间充质基质细胞(adipose-derivedmesenchymal stromal cells from male Kunming mice, AD-MSCs-M) CD29、CD44、CD90均呈阳性表达, 而CD31、CD45基本不表达, CD34表达存在性别差异, 表现在: AD-MSCs-F的CD34表达量随代数增加而增加至53.6%, 而AD-MSCs-M维持阴性; P12前AD-MSCs-F较AD-MSCs-M增殖速度较快,P12后增殖速度较慢, 衰老期出现较早, 且在P16衰老现象更严重; 在成脂成骨诱导下, AD-MSCs-F的油红O、茜素红阳性面积率均高于AD-MSCs-M, 在成软骨诱导下阿利新蓝阳性面积率无明显差异。该研究成功建立了适合昆明小鼠AD-MSCs的体外培养体系和鉴定方法, 成功获取了昆明小鼠AD-MSCs并完成了鉴定。雌雄小鼠AD-MSCs在形态和基本细胞特性上相似, 但在增殖能力、分化能力、衰老程度及CD34表达上存在一定的性别差异, 为AD-MSCs在基础研究、组织工程和再生医学等研究提供了差异化的实验依据和技术支持。
中文版
英文版