硫氢化钠对缺氧/复氧诱导的大鼠肺泡II型上皮细胞铜死亡的干预作用
程缘1# 骆珍珍1# 陈纪豪2# 韩丛美1 林芷漪3 黄曼1 戴雍月1 陈玲珑2 陈新国2 王万铁1*
该文旨在探讨外源性硫化氢供体硫氢化钠(sodium hydrosulfide, NaHS)对缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation, H/R)诱导的大鼠肺泡II型上皮细胞(alveolar epithelial type II cells, ATII)损伤的影响及可能机制, 重点关注铜死亡(cuproptosis)相关分子通路在其中的作用。采用RLE-6TN大鼠肺泡II型上皮细胞系, 建立H/R损伤模型。CCK-8法检测细胞活力; 荧光探针检测细胞内Cu⁺水平; Western blot 检测铜转运蛋白及铜死亡相关蛋白的表达水平; RT-qPCR检测铜死亡相关基因的mRNA表达水平; JC-1染色检测线粒体膜电位; 化学发光法检测ATP含量; ELISA法检测PDHA1水平; 磺基水杨酸法检测柠檬酸含量。结果显示, H/R处理可显著抑制ATII活力并诱导氧化应激, 导致细胞内Cu⁺蓄积, CTR1表达上调, ATP7A、ATP7B表达下调; 同时, 铜死亡相关蛋白DLAT、DLST表达下调, 而FDX1、LIAS表达上调, DLAT寡聚体形成量增加; 铜死亡相关基因FDX1、LIAS表达水平上调, DLAT、DLD基因表达下调, 线粒体膜电位下降,ATP、PDHA1及柠檬酸含量降低。50 μmol/L NaHS预处理可显著逆转上述变化。研究表明: H/R可激活大鼠ATII细胞中铜死亡相关分子通路, 伴随铜代谢紊乱、线粒体功能障碍及代谢中间产物水平降低;NaHS预处理可通过调节铜代谢稳态、抑制铜死亡相关通路活化、改善线粒体功能, 减轻ATII的H/R损伤,从而发挥保护作用。
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