YAP1激活Wnt/β-catenin通路调控细胞间质样干性参与乳腺癌曲妥珠单抗耐药
叶星明1 许扬梅1 吴秀凤2 刘青1 苏莉莉1 林晓为1 陈莉1 黄丽洁1 刘沁颖1*
Yes相关蛋白1(Yes associated-protein 1, YAP1)被报道可以与HER4相互作用调控上皮–间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT), 在胃癌曲妥珠单抗耐药的发生中发挥重要作用,但其是否通过调控细胞发生间质样干性(mesenchymal-like stemness)参与曲妥珠单抗的耐药尚不清楚, 该文探讨YAP1通过参与细胞间质样干性转化在乳腺癌细胞曲妥珠单抗耐药中发挥的作用及其分子机制。建立乳腺癌曲妥珠单抗的耐药细胞株, 通过分别对野生株(wild-type, WT)和耐药(trastuzumab resistance, TR)转染YAP1的过表达载体(pcDNA3.1-YAP1)和小干扰序列(si-YAP1),逆转其在野生株和耐药株中的表达情况。采用qRT-PCR检测其上皮–间质性标志物[E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)]和干细胞标志物(CD44和Nanog) mRNA水平的表达情况; 采用Western blot检测E-cadherin、Vimentin、CD44以及Nanog的表达水平; 采用Transwell实验检测细胞侵袭能力; 采用肿瘤细胞成球实验检测细胞自我更新能力和干细胞特征; 采用MTT和平板克隆形成实验检测细胞耐药性和增殖能力。在干扰YAP1的表达后, 使用Western blot以及qRT-PCR检测耐药细胞株中β-catenin、Cyclin D1以及CD44的表达水平, 进而鉴定Wnt/β-catenin通路的激活情况。在耐药株中, 下调YAP1可以升高E-cadherin, 降低Vimentin、CD44以及Nanog的表达水平, 抑制细胞间质转化, 降低细胞侵袭、成球能力, 减弱干细胞特征, 增强细胞对曲妥珠单抗的敏感性。反之, 在野生株中, 过表达YAP1蛋白可以降低E-cadherin, 升高Vimentin、CD44以及Nanog的表达水平, 促进细胞间质转化, 提高细胞侵袭和成球能力, 增强干细胞特征, 同时增强细胞对曲妥珠单抗的耐药性。在耐药株中沉默YAP1的表达后, 可降低Wnt/β-catenin通路的激活水平。我们的研究表明, YAP1可调控乳腺癌细胞间质性和干性特征的表达, 进而参与曲妥珠单抗的耐药, 并且其作用与激活Wnt/β-catenin通路相关。进一步地, YAP1与HER2阳性乳腺癌患者较差的预后显著相关。
中文版
英文版