一种高产外泌体的CHO工程化细胞的构建
王如萍1,2# 漫未玲2# 王丽娟1# 李响2 朱天昊2 何盈盈1,2 林艳丽2 吴晓洁2 崔雨萌2 黎扬华2 庞芳2 李莹2 马岳2 周成江1* 王友亮2*
(1内蒙古科技大学包头医学院, 包头 014060; 2军事科学院军事医学研究院前沿生物技术实验室, 北京 100071)
摘要 :
外泌体作为天然药物递送载体, 具有高生物相容性、稳定性及低免疫原性的优势, 在生物医学研究中应用价值显著, 但其天然分泌产量低, 严重限制了其临床转化。该研究利用中国仓鼠卵巢-K1(CHO-K1)细胞高效表达外源基因的能力, 结合重组酶介导的盒式交换(RMCE)技术, 定点整合了调控外泌体分泌的关键基因NADB(调控能量代谢)、STEAP3(调控囊泡形成)和SDC-4(促进外泌体分泌), 构建了稳定高产外泌体的CHO-K1工程化工具细胞株。结果显示, 定点整合外泌体促进器对细胞生长无影响。经纳米粒子追踪分析(NTA)检测发现, 单克隆细胞株clone1的外泌体颗粒数较野生型CHO-K1细胞增加约5倍。因此, 本研究成功构建了CHO-K1工程化外泌体生产系统, 实现了外泌体的稳定、高效分泌, 为外泌体的规模化生产奠定了基础。
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