KIF11通过NLRP3-caspase-1-焦亡途径调节肿瘤微环境促进肾细胞癌细胞生长
魏久富* 李春生 梁梦蝶 李绍林
该文旨在探讨驱动蛋白家族成员11(KIF11)对肾细胞癌(RCC)细胞焦亡的影响及潜在机制。将ACHN细胞分为7组: si-KIF11-NC组、si-KIF11组、si-KIF11+Ac-YVAD-CMK组、siNOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)-NC组、si-NLRP3组、si-NLRP3+si-KIF11组、siKIF11+MCC950组。逆转录实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)和蛋白质免疫印迹(Westernblot)分析细胞KIF11、NLRP3及焦亡相关基因或蛋白表达情况; 酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒检测细胞胱天蛋白酶-1(caspase-1)活性及白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-18水平; 流式细胞术检测细胞焦亡率; 克隆形成实验和细胞划痕实验分别检测细胞增殖与迁移情况。结果显示, 与HK-2细胞相比, RCC细胞中KIF11 mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.05), 而caspase-1和NLRP3蛋白表达水平均明显降低(P<0.05)。与si-KIF11-NC组相比, si-KIF11组caspase-1活性、IL-1β水平、IL-18水平、活化型胱天蛋白酶-1(cleaved caspase-1)蛋白水平、N-GSDMD蛋白水平、IL-1β蛋白水平、IL-18蛋白水平、细胞焦亡率均明显升高(P<0.05)。与si-KIF11组相比, si-KIF11+Ac-YVADCMK组caspase-1活性、IL-1β水平、IL-18水平、cleaved caspase-1蛋白水平、N-GSDMD蛋白水平、IL-1β蛋白水平、IL-18蛋白水平、细胞焦亡率均明显降低(P<0.05)。与si-KIF11组相比, siNLRP3+si-KIF11组、si-KIF11+MCC950组ACHN细胞中NLRP3、cleaved caspase-1、N-GSDMD、IL-1β、IL-18蛋白表达水平均明显降低, 且细胞焦亡率明显降低(P<0.05)。与si-KIF11-NC组相比, si-KIF11组ACHN细胞克隆形成数量、迁移率均明显降低(P<0.05)。与si-KIF11组相比, siKIF11+Ac-YVAD-CMK组、si-NLRP3+si-KIF11组、si-KIF11+MCC950组ACHN细胞克隆形成数量、迁移率均明显增加(P<0.05)。因此, KIF11敲除可能通过诱导NLRP3炎性小体调控的细胞焦亡, 从而抑制RCC细胞的增殖与迁移。
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