乳腺癌来源细胞外泌体通过miR-374a-5p/ARRDC3轴促进肿瘤免疫逃逸

该研究旨在探究乳腺癌(BC)来源外泌体(Exo)通过miR-374a-5p靶向抑制蛋白结构域蛋白3(ARRDC3)的分子机制, 及其在促进肿瘤免疫逃逸中的作用, 为乳腺癌免疫治疗提供新靶点。研究采用qRT-PCR检测乳腺癌细胞中miR-374a-5p和ARRDC3的表达水平。提取MDA-MB-231细胞的外泌体, 并将其与MDA-MB-231细胞共培养48 h。将MDA-MB-231细胞分为6组: Con组、ExoNC组、NC inhibitor组、miR-374a-5p inhibitor组、miR-374a-5p inhibitor+sh-NC组和miR-374a-5pinhibitor+sh-ARRDC3组。通过平板克隆、划痕实验和Transwell实验分别检测细胞增殖、迁移和侵袭能力。与CD8⁺ T细胞共培养, 检测CD8+ T细胞凋亡水平及对癌细胞的杀伤率。ELISA法检测细胞上清中细胞因子水平, qRT-PCR和蛋白免疫印迹法检测PD-L1表达情况。结果显示, 与正常乳腺上皮细胞MCF-10A相比, 在MDA-MB-231、Hs578T、MDA-MB-468和MDA-MB-453等乳腺癌细胞中, miR-374a-5p表达显著上调, ARRDC3表达显著下调(P<0.05)。GEPIA数据库分析显示, ARRDC3在乳腺癌组织中表达水平显著降低(P<0.05)。与Con组相比, Exo-NC组和NC inhibitor组的miR374a-5p表达量、平板克隆数、穿膜细胞数显著增加, 划痕修复率、CD8⁺ T细胞凋亡率显著升高(P<0.05), TNF-α、IFN-γ、IL-4水平, CD8⁺ T细胞的杀伤率以及ARRDC3表达水平显著降低(P<0.05);与Exo-NC组和NC inhibitor组相比, miR-374a-5p inhibitor组miR-374a-5p表达量、平板克隆数、穿膜细胞数显著减少, 划痕修复率、CD8⁺ T细胞凋亡率显著降低(P<0.05), TNF-α、IFN-γ、IL-4水平,CD8+ T细胞的杀伤率以及ARRDC3表达水平显著升高(P<0.05); 与miR-374a-5p inhibitor+sh-NC组相比, miR-374a-5p inhibitor+sh-ARRDC3组的ARRDC3表达下调, TNF-α、IFN-γ、IL-4水平以及CD8⁺ T细胞的杀伤率显著降低(P<0.05), 平板克隆数、穿膜细胞数显著增加, 划痕修复率、CD8⁺T细胞凋亡率和PD-L1表达水平显著升高(P<0.05)。综上所述, 乳腺癌细胞来源的外泌体可通过miR-374a-5p/ARRDC3轴上调PD-L1表达, 抑制肿瘤微环境中CD8⁺ T细胞的活性, 进而促进癌细胞的免疫逃逸。

CSTR: 32200.14.cjcb.2026.06.0003