硫氢化钠对低氧诱导的肺动脉内皮细胞铜死亡的干预
黄曼1# 周海珍2# 程缘1 韩丛美3 袁琳波3 尤利益4* 王万铁1*
该文探讨了外源性硫化氢供体–硫氢化钠(NaHS)对低氧(hypoxia)诱导的人肺动脉内 皮细胞(HPAEC)功能、代谢的影响及其机制。采用免疫荧光法进行细胞鉴定, 通过CCK-8法确定 NaHS抑制低氧诱导HPAEC损伤的最适浓度。ELISA法检测HPAEC内皮素-1(endothelin-1, ET-1)、 一氧化氮(nitric oxide, NO)、前列环素(prostacyclin I2, PGI2)的含量; 荧光法检测各组HPAEC中Cu+浓 度; Western blot法检测铜转运蛋白CTR1、ATP7A、ATP7B以及铜死亡指标FDX1、LIAS、DLAT、 DLAT Dimer、DLST水平; RT-qPCR法检测FDX1、LIAS、DLAT、DLD mRNA表达水平; 免疫荧光法 检测FDX1和DLAT蛋白表达情况; JC-1线粒体膜电位检测试剂盒检测细胞线粒体膜电位变化; 化学 发光法检测细胞中的ATP含量; ELISA法检测丙酮酸脱氢酶E1亚基α1(pyruvate dehydrogenase E1 sub unit alpha 1, PDHA1)含量; 磺基水杨酸法检测柠檬酸(citric acid, CA)含量。研究结果显示: NaHS抑 制低氧诱导的HPAEC损伤的最佳浓度为200 μmol/L。低氧条件下, 内皮细胞分泌性介质ET-1的浓度 升高, NO和PGI2的浓度降低; 细胞中Cu+浓度明显增多, 铜转运蛋白1表达显著上调, 铜外排蛋白ATP7A/B 表达显著下调, 铜死亡指标FDX1、LIAS、DLAT、DLST表达水平均显著下调, 且DLAT Dimer表达水平 显著上调; 铜死亡FDX1、LIAS、DLAT、DLD基因表达水平均显著下调; 同时线粒体功能指标JC-1 和ATP表达水平显著降低; 三羧酸循环指标PDHA1和CA含量显著降低。加入NaHS(200 μmol/L)后, 上述指标的异常变化均被不同程度逆转。研究结果表明: 缺氧可引发HPAEC铜死亡, 导致细胞线 粒体功能、代谢紊乱; NaHS可通过抑制铜死亡改善低氧诱导的HPAEC功能、代谢紊乱。
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