小鼠结肠平滑肌细胞的原代培养与优化
吴静文 肖长芳 姚一博*
(上海中医药大学附属龙华医院, 肛肠科, 上海 200032)
摘要 :
小鼠结肠平滑肌细胞在肠动力障碍疾病的研究中具有重要作用, 然而目前尚未建立 一套简便可靠的体外原代培养体系。该文旨在建立并优化小鼠结肠平滑肌细胞原代培养的方法。 采用酶消化法联合组织块贴壁法分离和培养小鼠原代结肠平滑肌细胞, 并对培养条件(小鼠年龄、 培养皿规格、血清浓度)进行优化。通过差速贴壁法纯化细胞, 免疫荧光检测细胞纯度, 并利用 CCK-8法测定小鼠原代结肠平滑肌细胞增殖能力。进一步构建三维胶原凝胶培养模型, 验证结肠 平滑肌细胞的自主收缩功能。与组织块贴壁法相比, 酶消化法联合组织块贴壁法显著缩短细胞贴 壁和融合时间, 且细胞纯度更高(94.52%±1.76% vs 87.87%±2.48%, P<0.05)。8周龄小鼠的结肠平滑 肌细胞增殖速度更快, 细胞排列整齐; 在6孔板和15%胎牛血清完全培养基的培养条件下细胞的生 长速度显著提升。CCK-8法测定结果显示, 小鼠原代结肠平滑肌细胞的生长活性良好, 生长曲线呈 “S”型。三维胶原凝胶实验显示, 空白对照组的胶原收缩率显著高于2,3-丁二酮单肟(BDM)抑制组 (31.57%±5.32% vs 11.96%±4.09%, P<0.05), 证实结肠平滑肌细胞具有自主收缩功能。该研究成功 建立了一套小鼠结肠平滑肌细胞的原代培养体系, 通过优化培养方法和条件, 显著提高了细胞的纯 度和生长速度, 并验证了其功能特性。
中文版
英文版