miR-411-3p调控HIF-1α/VEGF通路对结直肠癌细胞增殖、迁移和血管生成拟态的影响
刘宇关1 刘林涛2 徐博2 王茂楠2*
该文旨在探究miR-411-3p调控缺氧诱导因子1α(HIF-1α)/血管内皮生长因子(VEGF)通 路对结直肠癌(CRC)细胞增殖、迁移和血管生成拟态的影响。将体外培养人CRC细胞SW480随机 分为Control组、miR-NC组、miR-411-3p mimics组、DMOG组(HIF-1α/VEGF通路激活剂DMOG)、 miR-411-3p mimics+DMOG组、miR-411-3p mimics+NC组和miR-411-3p mimics+HIF-1α组。采用双 荧光素酶报告实验检测miR-411-3p与HIF-1α之间的关系; MTT、克隆形成实验检测各组细胞增殖 情况；流式细胞术检测各组细胞凋亡情况; 划痕实验检测各组细胞迁移情况; 血管模拟形成实验检 测各组细胞血管生成拟态(VM)形成情况; 免疫荧光实验检测各组细胞Ki67、CD31、VE-cadherin 表达情况; qRT-PCR检测各组细胞miR-411-3p、HIF-1α、VEGF mRNA表达情况; Western blot实验 检测各组细胞HIF-1α、凋亡、迁移相关蛋白表达情况。双荧光素酶报告实验结果显示, miR-411 3p mimics组与miR-NC组比较, 荧光素酶活性显著降低(P<0.05)。miR-411-3p mimics组与Control组、 miR-NC组比较, 细胞管腔结构破坏严重, 存活率、克隆形成数、划痕愈合率、管腔结构数量降低, Ki67、CD31、VE-cadherin荧光强度降低, HIF-1α、VEGF mRNA和蛋白表达水平以及N-cadherin 表达水平降低, 凋亡率以及Bax、cleaved caspase-3、miR-411-3p、E-cadherin表达水平升高(P<0.05); DMOG组与Control组比较, 细胞管腔结构损伤减轻, 克隆形成数、划痕愈合率、管腔结构数量升 高, Ki67、CD31、VE-cadherin荧光强度升高, HIF-1α、VEGF mRNA和蛋白水平以及N-cadherin表 达水平增加, 凋亡率以及Bax、cleaved caspase-3、E-cadherin表达水平降低(P<0.05); miR-411-3p mimics+DMOG组与DMOG组比较, 细胞管腔结构破坏加重, 存活率、克隆形成数、划痕愈合率、 管腔结构数量降低, Ki67、CD31、VE-cadherin荧光强度降低, HIF-1α、VEGF mRNA和蛋白水平 以及N-cadherin表达水平降低, 凋亡率以及Bax、cleaved caspase-3、miR-411-3p、E-cadherin表达 水平升高(P<0.05); miR-411-3p mimics+DMOG组与miR-411-3p mimics组比较, 细胞管腔结构破坏 减轻, 存活率、克隆形成数、划痕愈合率、管腔结构数量升高, Ki67、CD31、VE-cadherin荧光强 度升高, HIF-1α、VEGF mRNA和蛋白水平以及N-cadherin表达水平增加, 凋亡率以及Bax、cleaved caspase-3、E-cadherin表达水平降低(P<0.05); 与miR-411-3p mimics组、miR-411-3p mimics+NC组 比较, miR-411-3p mimics+HIF-1α组细胞存活率、克隆形成数、划痕愈合率、管腔结构数量升高, Ki67、CD31、VE-cadherin荧光强度升高, HIF-1α、VEGF mRNA和蛋白水平以及N-cadherin表达 水平升高, 凋亡率以及Bax、cleaved caspase-3、E-cadherin表达水平降低(P<0.05)。上调miR-411 3p表达, 可能通过抑制HIF-1α/VEGF通路, 抑制结直肠癌细胞增殖、迁移和VM形成。
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