木犀草素通过调节PI3K/AKT/GSK-3β信号通路促进铜死亡增强乳腺癌细胞顺铂敏感性的机制研究
毕超 史晓光 胡俊生 赖瑞 张娟 霍巧玲 刘曼*
该文旨在探究木犀草素对乳腺癌(BC)细胞顺铂(DDP)敏感性的影响及其通过调节 PI3K/AKT/GSK-3β信号通路促进铜死亡的机制。采用低浓度加量持续诱导法建立乳腺癌的顺铂耐 药细胞株MDA-MB-231/DDP-R。MTT法检测不同浓度顺铂和木犀草素对MDA-MB-231和MDA MB-231/DDP-R抑制率的影响。将MDA-MB-231/DDP-R分为5组: 对照组、顺铂组、木犀草素组、 顺铂+木犀草素组和740Y-P组。采用Transwell实验检测细胞侵袭能力, 细胞划痕实验检测细胞迁 移能力, 流式细胞术检测细胞凋亡水平。用比色法试剂盒检测细胞内Cu2⁺水平, 采用蛋白免疫印 迹技术分别检测铜死亡相关蛋白的表达水平, 以及PI3K/AKT/GSK-3β信号通路相关蛋白的表达水 平。构建裸鼠移植瘤模型, 检测瘤体体积和质量。结果显示: 随着顺铂浓度增加, 其对MDA-MB-231 和MDA-MB-231/DDP-R细胞的抑制率显著上升(P<0.05); 与MDA-MB-231细胞相比, 顺铂和木犀草 素对MDA-MB-231/DDP-R细胞的抑制率显著降低(P<0.05)。与顺铂组相比, 顺铂+木犀草素组的细 胞抑制率显著增加(P<0.05)。与对照组相比, 顺铂组、木犀草素组及顺铂+木犀草素组的侵袭细胞数, 细胞迁移率, ATP7A蛋白表达水平, p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT和p-GSK-3β Ser9/GSK-3β值, 以及裸鼠 瘤体体积和质量均显著降低(P<0.05); 细胞凋亡率、Cu⁺浓度、DLAT和FDX1蛋白表达水平则显著升 高(P<0.05)。与顺铂组和木犀草素组相比, 顺铂+木犀草素组的侵袭细胞数, 细胞迁移率, ATP7A蛋白 表达水平, p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT和p-GSK-3β Ser9/GSK-3β值, 以及裸鼠瘤体体积和质量均显著 降低(P<0.05); 细胞凋亡率、Cu⁺浓度、DLAT和FDX1蛋白表达水平显著增加(P<0.05)。与顺铂+木犀 草素组相比, 740Y-P组的侵袭细胞数, 细胞迁移率, ATP7A蛋白表达水平, p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT 和p-GSK-3β Ser9/GSK-3β值, 以及裸鼠瘤体体积和质量均显著增加(P<0.05); 细胞凋亡率、Cu⁺浓度、 DLAT和FDX1蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。因此, 木犀草素可通过调节PI3K/AKT/GSK-3β信号 通路诱导铜死亡, 从而增强乳腺癌细胞对顺铂的敏感性。
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