NK-92MI工程细胞增强HER2-CAR-CIK对卵巢癌细胞杀伤功能的研究
吴光源1# 安仲姚1,2# 刘小龙1 王海龙1 于阔1 王欣1 刘杨1 戚鹏飞1 范圣瑾3,4 王振坤1,3*
CAR-CIK疗法作为一种前景广阔的新策略, 其疗效却受限于传统扩增方法引发的CIK细胞功能耗竭。为此, 提高关键的CD3+CD56+细胞亚群比例并维持其功能, 成为了提升治疗效果的核心所在。该研究利用基因工程技术构建了共表达膜结合型IL-21和CD137L的NK-92MI工程细胞(IC-92),通过联合IC-92和细胞因子(IFN-γ、OKT3、IL-1α和 IL-2)的优化培养体系对CIK及HER2-CAR-CIK细胞进行了扩增培养。采用流式细胞术检测效应分子表达情况; 利用Incucyte S3活细胞分析系统评估CAR-CIK细胞的HER2特异性肿瘤杀伤能力; 整合RNA测序和基于LC-MS的非靶向代谢组学, 初步探索IC-92联合细胞因子共培养策略对CIK细胞功能调控的相关机制。结果表明, 联合培养可显著提高CIK细胞的增殖活性及CD3⁺CD56⁺效应细胞比例, 且能维持CD3⁺CD56⁺细胞表面NKG2D、NKp30等激活性受体的表达。与对照组相比, IC-92联合细胞因子能诱导更高比例效应记忆样T细胞分化, 显著增强HER2-CAR-CIK细胞对人卵巢癌细胞系SK-OV-3的靶向杀伤能力。测序结果进一步证实, 在联合培养扩增的CIK细胞中, CD3+CD56+细胞群体的HIF-1与AMPK信号通路被显著富集, 同时其糖代谢和鞘磷脂代谢相关的差异基因在通路里显著富集。综上, 该研究成功构建了可共表达mIL-21与CD137L的IC-92工程细胞, 通过联合IC-92和细胞因子能高效诱导出CD3+CD56+高比例的CIK细胞, 并促进其向效应记忆样表型分化。功能与机制研究证实, 联合培养扩增的HER2-CAR-CIK细胞展现出显著增强的靶向杀伤能力, 其作用机制与免疫信号的激活及糖代谢与鞘磷脂代谢的重塑密切相关。
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