基于内质网应激诱导的自噬探讨右美托咪定联合瑞马唑仑延缓EAE模型小鼠疾病进程

该文探讨右美托咪定(Dex)联合瑞马唑仑(Rem)对脂多糖(LPS)诱导的BV2小胶质细胞损伤及实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型小鼠的影响和机制。体外实验采用LPS刺激BV2细胞构建炎症模型; 体内实验通过髓鞘MOG35-55免疫C57BL/6小鼠建立EAE模型。CCK8检测细胞活力, 细胞划痕和Transwell实验评估迁移侵袭能力, 流式细胞术分析凋亡率, ELISA检测炎症因子白细胞介素-1β(IL-1β)/白细胞介素-6(IL-6)/肿瘤坏死因子-α(TNF-α), 共聚焦显微镜和 Western blot检测内质网应激标志物免疫球蛋白重链结合蛋白(Bip)/CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)/磷酸化内质网应激传感器肌醇需求酶1α(IRE1α)与自噬蛋白微管相关蛋白1轻链3II/I(LC3II/I)、PTEN诱导激酶1(PINK1)、帕金蛋白(Parkin)、隔离体蛋白1(p62)、贝林蛋白1(Beclin1)表达情况, 并采用HE/LFB/TUNEL染色评估脊髓组织病理、脱髓鞘及凋亡情况。Dex单药在 9 μmol/L显著提升细胞活力 (P<0.001), 而联合 Rem(90 μg/mL)后细胞活力进一步升高(P<0.01); Dex+Rem组细胞愈合(P<0.01)与侵袭能力较Dex和Rem组提升(P<0.05)。与LPS2组相比,Dex+Rem2组细胞凋亡率降低(P<0.001), 炎症因子(IL-1β/IL-6/TNF-α)释放减少(P<0.001), 内质网应激蛋白(Bip/CHOP/IRE1α)表达下调(P<0.001), 自噬流激活(LC3II/I、PINK1、Parkin、Beclin1蛋白表达水平上升, p62蛋白表达水平下降)(P<0.001)。而Tun可逆转以上所有过程。体内实验中, Dex+Rem3组较Model组显著提高EAE小鼠神经功能评分(P<0.01), 减少脊髓神经元凋亡及减轻脱髓鞘, 并同步抑制脊髓组织内质网应激蛋白Bip/CHOP/IRE1α的表达和促进自噬(LC3II/I、Beclin1蛋白表达水平上升, p62蛋白表达水平下降)(P<0.001)。右美托咪定联合瑞马唑仑通过协同抑制内质网应激、激活自噬及减轻炎症反应, 有效减轻了LPS诱导的细胞损伤和延缓了EAE模型神经病理进程, 为多发性硬化症的临床治疗提供了新策略。

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