miR-944靶向RAB1A对神经胶质瘤细胞增殖和迁移的影响
朱颖婷 王远 罗明 陈洁 罗志华*
该文旨在探讨微小RNA-944(miR-944)通过靶向Rab家族蛋白1A(RAB1A)对神经胶质瘤细胞增殖和迁移的影响。收集神经胶质瘤患者的癌组织及癌旁组织, 体外培养正常对照细胞NHA和神经胶质瘤细胞系(A172、LN229、SHG-44、U251、U-87 MG), qRT-PCR实验检测组织和细胞中miR-944和RAB1A mRNA表达水平; 通过TCGA数据库分析miR-944、RAB1A与神经胶质瘤临床预后的关系; 将U251细胞分为对照组(Control)、miR-mimic-NC组、miR-944-mimic组、miR-944-mimic+pcDNA3.1-NC组、miR-944-mimic+pcDNA3.1-RAB1A组; qRT-PCR实验检测各组U251细胞中miR-944和RAB1A mRNA表达水平; 采用CCK-8法检测细胞存活率；采用克隆形成实验检测各组细胞克隆数; 采用Transwell实验检测各组细胞的迁移能力; Western blot检测各组U251细胞中RAB1A和上皮–间充质转化(EMT)相关蛋白的表达水平; 双荧光素酶实验测定miR-944与RAB1A的靶向关系。通过异种移植瘤实验分析miR-944对神经胶质瘤细胞体内生长的影响。与癌旁组织相比, 神经胶质瘤组织中miR-944表达水平显著降低(P<0.05), RAB1A mRNA表达水平显著升高(P<0.05); 与正常对照细胞NHA相比, 神经胶质瘤细胞系(A172、LN229、SHG-44、U251、U-87 MG)中miR-944水平显著降低(P<0.05), RAB1A mRNA表达水平显著升高(P<0.05); TCGA数据库中, miR-944、RAB1A均与神经胶质瘤患者预后相关(P<0.05)。与miR-mimic-NC组相比, miR-944-mimic组U251细胞中RAB1AmRNA及蛋白表达水平、细胞存活率、克隆数、迁移率以及N-cadherin、MMP-9、Vimentin、Fi-bronectin、Snail、Slug水平显著降低(P<0.05), miR-944和E-cadherin、ZO-1水平显著升高(P<0.05);与miR-944-mimic+pcDNA3.1-NC组相比, miR-944-mimic+pcDNA3.1-RAB1A组RAB1A mRNA及蛋白表达水平、细胞存活率、克隆数、迁移率以及N-cadherin、MMP-9、Vimentin、Fibronectin、Snail、Slug水平显著升高(P<0.05), E-cadherin、ZO-1水平显著降低(P<0.05); 与RAB1A-WT和miR-mimic-NC共转染组相比, RAB1A-WT和miR-944-mimic共转染组细胞中相对荧光素酶活性显著降低(P<0.05)。体内实验结果显示, 与miR-mimic-NC组相比, miR-944-mimic组肿瘤体积和质量及肿瘤组织中RAB1A mRNA及蛋白表达水平显著降低(P<0.05), miR-944水平显著升高(P<0.05); 与miR-944-mimic+pcDNA3.1-NC组相比, miR-944-mimic+pcDNA3.1-RAB1A组肿瘤体积和质量及肿瘤组织中RAB1A mRNA及蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。miR-944可能通过靶向调控RAB1A表达, 阻碍EMT过程, 进而抑制神经胶质瘤细胞增殖和迁移。
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