大鼠脑微血管内皮细胞的分离与原代培养
许熊飞 李润平* 李 泉 刘文武 练庆林 刘 昀 孙学军 蒋春雷
第二军医大学海医系航海医学教研室，上海 200433
摘要 : 为了建立大鼠脑微血管内皮细胞体外培养模型，探索纯度较高的大鼠脑微血管内皮 细胞分离和原代培养的方法并进行形态学观察。采用2～3周龄的 SD大鼠，解剖得到大脑皮质，两次酶消化及牛血清白蛋白或葡聚糖和 Percoll梯度离心获得较纯的脑微血管段后，接种于涂布基质 的培养皿进行原代培养；培养的细胞采用相差显微镜形态学观察、透射电镜观察及Ⅷ因子相关抗 原免疫组化检测鉴定。结果发现，培养12 h即可见细胞从贴壁的脑微血管段周围长出，细胞呈短梭形，区域性单层生长， 5～7天内皮细胞融合，内皮细胞纯度达90%以上；内皮细胞的贴壁和生 长有赖于所涂布的基质，纤连蛋白/IV型胶原优于鼠尾胶和明胶 ；VIII因子相关抗原免疫组化检测内皮细胞表达阳性，透射电镜观察可见相邻内皮细胞间存在紧密连接结构。 提示该方法能成功进行纯度较高的大鼠脑微血管内皮细胞原代培养，可用于脑微血管内皮的生理、生化及药理学研究， 亦可用于构建大鼠血脑屏障模型。
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