一种适用于AAV病毒包装的低内毒素质粒提取方法
何金声 陆艺桢 张玉雪 韦雅露 高浩珅 何榕晏 长孙东亭 罗素兰*
(广西特色生物医药重点实验室, 广西大学医学院, 南宁 530004)
摘要 :
该研究旨在建立一种适用于腺相关病毒载体包装的低成本、高效率的转染用低内毒素质粒提取方法。基于相分离的浊点萃取原理, 对传统碱裂解缓冲液体系进行优化, 整合了裂解液与内毒素清除剂, 简化了操作流程。通过吸光度检测、酶切与琼脂糖凝胶电泳分析、鲎试剂检测、实时荧光定量PCR方法, 综合评价所提取质粒的质量、内毒素残留水平与生物学活性, 并与商品化试剂盒进行对比。结果表明, 该方法质粒产率较高, 纯度、序列完整性良好, 内毒素残留低于1 EU/μg,可满足病毒包装需求, 所制备病毒在体外具备良好活性; 该方法每次提取操作中内毒素清除成本与商品化内毒素清除剂相比下降85%以上, 且可减少提取时间30 min。该方法在保证质粒质量的同时显著简化操作流程, 对腺相关病毒载体的生产具有较高的实用价值和推广潜力。
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