桃叶珊瑚苷调节RhoA/ROCK信号通路对食管癌细胞放疗敏感性的影响
宋玉玲1 汪学昌1 金曼2 杨世荣1*
该文探讨了桃叶珊瑚苷(AU)对食管癌细胞(EC9706细胞)放疗敏感性以及对Ras同源基因家族蛋白A/Rho相关卷曲螺旋结合蛋白激酶(RhoA/ROCK)信号通路的影响。使用浓度为0、25、50、75、100、125 μmol/L的AU处理EC9760细胞24 h后, 采用CCK-8法检测细胞存活率, 筛选AU的最佳作用浓度, 进行后续实验。将EC9706细胞分为5组: 对照组(Control组)、放疗组(6Gy组)、AU组、AU+6Gy组、AU+6Gy+RhoA激活剂组(AU+6Gy+Naciclasine组)。克隆形成实验和Edu检测细胞的增殖情况; 流式细胞术检测细胞的凋亡情况; 酶联免疫吸附测定(ELISA)技术对细胞培养液上清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-2(IL-2)的含量进行检测; 鬼笔环肽染色法观察细胞骨架; Western blot法检测细胞中B细胞淋巴瘤蛋白-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、上皮钙黏素(E-cadherin)、神经钙黏蛋白(N-cadherin)、RhoA、ROCK蛋白水平; 构建食管癌移植瘤模型, 测量肿瘤的质量和体积, Western blot检测肿瘤组织的RhoA、ROCK蛋白水平。与0 μmol/L相比,25~125 μmol/L浓度的AU可以降低EC906细胞的活力, 选择100 μmol/L的AU进行后续实验。与Control组比较, 6Gy、AU组细胞克隆形成数和Edu阳性率, TNF-α、Bcl-2、N-cadherin、RhoA、ROCK蛋白水平明显降低, 细胞凋亡率, IFN-γ、Bax、E-cadherin、IL-2水平以及F-actin荧光强度明显升高(P<0.05); AU+6Gy组相比6Gy、AU组, 细胞克隆形成数和Edu阳性率, TNF-α、Bcl-2、N-cadherin、RhoA、ROCK蛋白水平明显降低, 而细胞凋亡率, Bax、E-cadherin、IFN-γ、IL-2水平以及F-actin荧光强度明显升高(P<0.05); 与AU+6Gy组比较, AU+6Gy+Naciclasine组细胞克隆形成数和Edu阳性率, TNF-α、Bcl-2、N-cadherin、E-cadherin、RhoA、ROCK蛋白水平明显升高, 细胞凋亡率, Bax、IFN-γ、IL-2水平以及F-actin荧光强度降低(P<0.05)。裸鼠移植瘤实验表明, 与Control组比较, 6Gy、AU组裸鼠质量和体积以及RhoA和ROCK蛋白水平明显降低(P<0.05); AU+6Gy组相比于6Gy、AU组,裸鼠质量和体积及以RhoA和ROCK蛋白水平明显降低(P<0.05)。AU可能通过抑制RhoA/ROCK通路的信号转导增强食管癌细胞放疗敏感性。
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