泛素特异性蛋白酶36调控Caspase-8抑制肝癌细胞凋亡
韩军军 於伟明 赵文妍 金肇清 杨自强 陈炜青 陈飞华 龚谋春*
泛素特异性蛋白酶36(ubiquitin specific peptidase 36, USP36)是由USP36基因编码的去泛素化过程中的关键酶。它通过去除靶蛋白上的泛素修饰调节蛋白质的稳定性和功能, 在细胞内信号转导、蛋白质降解及细胞周期调控中发挥重要作用, 而其在肝癌中的功能和作用尚不清楚。本研究通过生物信息学分析USP36在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma, HCC)中的表达水平及其与临床预后的关系。构建USP36基因过表达和敲低的HepG2与Huh7肝癌细胞株, 分别在EGF因子和TNF-α因子刺激条件下进行细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡相关实验[四甲基偶氮唑盐法(MTT法)、小室迁移(Transwell迁移)、划痕实验、流式细胞术及原位末端标记法(TUNEL)]。通过蛋白质免疫印迹法(Western blot)分析半胱天冬酶-8蛋白(Caspase-8蛋白)、活化型半胱天冬酶-8蛋白(Cleaved-Caspase-8蛋白)表达水平。结果显示: USP36在HCC组织中显著高表达, 且其高表达与患者的总体生存率(OS)、无进展生存期(PFS)、无病生存期(DFS)和无复发生存期(RFS)均呈负相关。实验表明, USP36基因过表达组在EGF因子与TNF-α因子刺激下, Caspase-8总蛋白水平显著上升, 但活化形式Cleaved-Caspase-8蛋白下降, 同时细胞增殖、迁移与侵袭能力变强, 而凋亡水平大幅下降。相反,USP36敲低组表现出Caspase-8总量降低、Cleaved-Caspase-8表达量上升, 且细胞增殖、迁移和侵袭能力减弱, 凋亡水平提升。总之, USP36通过稳定Caspase-8, 抑制外源性凋亡并促进肿瘤细胞的增殖、迁移与侵袭, 从而在HCC的发生与发展中发挥促瘤作用。USP36有望成为肝癌治疗的潜在分子靶点。
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