马钱苷对成骨细胞及成骨细胞‒破骨细胞耦联的影响
王玉 杨林涛 孙博宇 刘宇 兰天 曾以德*
(山东中医药大学中医药创新研究院, 济南 250355)
摘要 :
该研究在促进成骨细胞分化的基础上, 探讨马钱苷(Loganin)对成骨细胞‒破骨细胞耦联功能的影响。以小鼠胚胎成骨细胞前体细胞(MC3T3-E1)和小鼠单核巨噬细胞白血病细胞(RAW264.7)为实验对象, 通过CCK-8法检测Loganin对MC3T3-E1细胞活性的影响; 碱性磷酸酶(ALP)染色、ALP活性试剂盒及茜素红染色评估Loganin对成骨细胞分化的影响; qRT-PCR法检测成骨分化相关基因的表达情况; Western blot法检测成骨分化相关蛋白的表达情况; 共培养系统检测Loganin对成骨细胞‒破骨细胞耦联的影响; TRAP染色和F-actin染色评估破骨细胞形成及破骨细胞吸收功能; qRT-PCR法检测破骨分化相关基因的表达。结果显示, Loganin在一定浓度范围(0.1 μmol/L和1 μmol/L)内显著提高MC3T3-E1细胞的活性、ALP活性以及促进矿化结节的形成, 且具有浓度依赖性。此外, Loganin(1 μmol/L)显著上调成骨分化标志物Runx2、OSX和OPG的基因表达水平以及Runx2、OPG和ALP的蛋白表达水平, 并且下调RANKL的基因及蛋白表达水平。共培养实验中, 含Loganin的条件培养基显著抑制破骨细胞及F-actin吸收环的形成, 且下调CTSK、TRAP基因的表达。因此, Loganin在促进成骨分化的基础上, 可能通过上调OPG和下调RANKL来影响成骨细胞–破骨细胞的耦联, 进而抑制破骨细胞的生成功能和破骨细胞的吸收功能, 调节骨代谢平衡。
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