C2C12细胞诱导分化为脂肪细胞的转录组分析
田洪伟1,2 美荣1,2 李玉玲1,2 乌云达来1,2*
(1内蒙古师范大学生命科学与技术学院, 呼和浩特 010022; 2内蒙古自治区高等学校生物多样性保护与可持续利用重点实验室, 呼和浩特 010022)
摘要 :
为了探究C2C12细胞转分化为脂肪细胞的关键基因, 实验采用添加IBMX、地塞米松、胰岛素和罗格列酮的培养基诱导C2C12细胞6天。通过油红O染色和免疫荧光染色方法鉴定诱导
前后细胞的分化情况, 利用转录组分析与实时荧光定量PCR技术评估差异表达基因的表达水平; 借助蛋白质免疫印迹实验测定蛋白水平; 运用酶联免疫吸附测定实验分析细胞状态。结果显示, 诱导6天后C2C12细胞经油红O染色可见大量脂滴, 免疫荧光染色则检测到FABP4阳性信号。基因本体(GO)分析与京都基因组百科全书(KEGG)通路分析发现, 病毒响应和免疫系统通路相关基因表达水平显著上调。进一步筛选出核心(Hub)基因Isg15、Ddx58、Ifit3、Irgm2、Eif2ak2、Irf9和Stat1。实时荧光定量PCR验证了Isg15、Fabp4和C/EBPα的表达上调, 免疫印迹实验证实了FABP4、IL-6蛋白水平增加。上调表达的Ddx58、Ifit3、Irgm2、Eif2ak2、Irf9和Stat1基因参与炎症反应, 以维持细胞存活。综上所述, 该研究揭示了肌细胞向脂肪细胞转化的部分分子机制, 为进一步理解肌源性脂肪生成提供了依据。
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