Cc10基因敲除小鼠模型的构建及气道炎症表型分析
龙洁1 魏丹丹1 吴全龙1 赵子莹1 张亚亚1 陈艳焦1,2 杨永清1,2 徐玉东1,2*
该研究旨在构建Cc10基因敲除小鼠模型, 并利用屋尘螨(HDM)诱导的哮喘模型, 分析 Cc10基因缺失小鼠的气道炎症表型。采用CRISPR/Cas9技术, 设计并体外转录针对Cc10基因2号外 显子的sgRNA和Cas9表达载体, 显微注射至受精卵后获得F0代基因敲除小鼠, 通过进一步繁育和 筛选, 最终获得稳定遗传的Cc10−/− 小鼠。利用HDM致敏和激发诱导小鼠过敏性哮喘模型, 通过分 析肺泡灌洗液(BALF)中白细胞及其分类计数、2型炎性相关细胞因子、肺组织PAS染色及Muc5ac mRNA的表达水平来评估Cc10基因缺失对小鼠气道炎症表型的影响。PCR扩增及测序结果显示, Cc10基因被成功敲除。Western blot分析表明, Cc10−/− 小鼠肺组织中CC10蛋白表达缺失。Cc10−/− 哮 喘模型小鼠BALF中白细胞总数显著高于野生型(WT)哮喘模型组, 且各分类细胞(中性粒细胞、淋 巴细胞、嗜酸性粒细胞、巨噬细胞和嗜碱性粒细胞)数量均显著增加。Cc10−/− 哮喘模型小鼠BALF 中2型炎性相关细胞因子IL-4、IL-5、IL-13水平显著高于野生型(WT)哮喘模型组。肺组织PAS染 色结果显示, Cc10−/− 哮喘模型小鼠具有更显著的支气管壁增厚、杯状细胞增生等病理变化, PAS染 色评分显著高于WT哮喘模型组。PCR结果显示, Cc10−/− 哮喘模型小鼠肺组织Muc5ac mRNA表达 水平显著高于WT哮喘模型组。该研究成功构建了Cc10基因敲除小鼠模型, 并证明了Cc10基因缺 失导致哮喘小鼠气道炎症加重, 气道黏液分泌增多, 提示CC10在调控气道炎症中发挥重要作用。 该模型将为探索CC10在哮喘及其他呼吸系统疾病中的作用机制提供重要工具。
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