没食子酸调控TLR4/NF-κB通路对UVB诱导人永生化角质形成细胞光损伤的保护作用

该文探究没食子酸调控Toll样受体4(Toll-like receptor 4, TLR4)/核因子κB(nuclear factor kappa-B, NF-κB)通路对紫外线B(UVB)诱导人永生化角质形成细胞光损伤的保护作用。将HaCaT 细胞分为空白组(未经任何处理)、UVB组(仅暴露于UVB)、没食子酸不同浓度(5、10和20 μg/mL) 组、没食子酸(20 μg/mL)+脂多糖(10 μg/mL)组, 除空白组外, 其余细胞均于相应药物处理后暴露于 UVB。MTT法检测细胞活性; 试剂盒检测超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)活性和丙二 醛(malondialdehyde, MDA)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6, IL-6)水平; TUNEL染色检测细胞凋亡; DCFH-DA探针和显色底物分别检测活性氧(reactive oxygen species, ROS)、半胱天冬蛋白酶(cysteinyl aspartate specific proteinase, caspase)-3和caspase-9活性; 蛋白质免 疫印迹法检测TLR4、NF-κB、诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase, iNOS)和前列腺素内 过氧化物合酶2(cyclooxygenase-2, COX-2)蛋白表达情况。将小鼠分为空白组、UVB组、50 mg/kg没 食子酸组和没食子酸+脂多糖组, 使用UVB诱导UVB组、50 mg/kg没食子酸组和没食子酸+脂多糖 组小鼠皮肤光损伤, 用50 mg/kg没食子酸治疗。与空白组比较, UVB组HaCaT细胞存活率和SOD活 性降低(P<0.05), ROS荧光强度、MDA、炎性因子(TNF-α和IL-6)水平、细胞凋亡指标(TUNEL阳 性细胞率、caspase-3和caspase-9活性)、TLR4、p-NF-κB、iNOS和COX-2蛋白水平升高(P<0.05); 与UVB组比较, 没食子酸不同浓度组HaCaT细胞存活率和SOD活性升高(P<0.05), ROS荧光强度、 MDA、炎性因子水平、细胞凋亡指标、TLR4、p-NF-κB、iNOS和COX-2蛋白水平降低(P<0.05); 与20 μg/mL没食子酸组比较, 没食子酸+脂多糖组HaCaT细胞存活率和SOD活性降低(P<0.05), ROS 荧光强度、MDA、炎性因子水平、细胞凋亡指标、TLR4、p-NF-κB、iNOS和COX-2蛋白水平升 高(P<0.05)。50 mg/kg没食子酸组小鼠皮肤状态优于UVB组; 没食子酸+脂多糖组小鼠皮肤相较于 50 mg/kg没食子酸组损伤严重。该研究得出没食子酸通过抑制TLR4/NF-κB通路减轻UVB诱导的 人永生化角质形成细胞光损伤。

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