小鼠肺组织单细胞悬液制备的酶消化法比较研究
董心怡 谢楠希 徐玉东 王宇 杨永清* 陈艳焦*
(上海中医药大学岳阳中西医结合医院上海市针灸经络研究所, 上海 200030)
摘要 :
该研究比较两种胶原酶及配合使用Percoll细胞分离液对小鼠肺组织单细胞悬液中淋 巴细胞得率、活性和数量的影响, 为单细胞测序前处理提供技术参考。将12只C57BL/6小鼠随机 分为四组, 分别是I型胶原酶消化组(G1)、I型胶原酶消化+Percoll细胞分离组(G2)、IV型胶原酶消 化组(G3)和IV型胶原酶消化+Percoll细胞分离组(G4)。四组方法所提取的肺组织单细胞悬液, 于显微镜下进行形态学观察, 拍照并计数, 后采用流式细胞术检测单个核细胞、活细胞和淋巴细胞的 得率和数量, 以及不同免疫细胞亚群的比例和数量。结果显示, 两种胶原酶对小鼠肺组织细胞解 离效果无明显差异, G1组制备的肺单细胞数量显著高于G3组(P<0.05)。相同数量的细胞中, G2和 G4组获得单个核细胞、活性细胞、CD45+ 细胞、CD3+ T细胞、CD8+ T细胞、NK细胞个数均显著 高于G1和G3组(P<0.05), 但在CD4+ T细胞、CD11c+ 细胞、NKT细胞个数上没有显著优势。应用I 型胶原酶消化可以获得更多的细胞总数, 但应用IV型胶原酶消化可以获得更多的淋巴细胞。经过 Percoll细胞分离液处理的G2和G4组可以分离获得更高活性的单个核细胞、CD45+ 细胞、CD3+ T 细胞、CD8+ T细胞和NK细胞, 该研究为今后进行肺组织单细胞测序前处理提供了重要的技术参考。
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