一种改良胰蛋白酶消化液及其应用
夏晴# 张雨晴# 喻峰 童莹 吴军*
(中国科学院分子细胞科学卓越创新中心细胞库, 上海 200031)
摘要 :
该研究旨在提供一种改良胰蛋白酶消化液, 并通过将其与0.25%胰蛋白酶、胰蛋白 酶-EDTA(0.25%)、柠檬酸胰酶进行比较, 探究其在细胞消化中的作用优势及更多应用。通过pH 值测定、显微镜下整体观察细胞消化程度以评估改良胰蛋白酶消化液在不同保存条件时的稳定 性、时效性及消化能力变化情况; 通过计算细胞间分散率、台盼蓝染色、CCK-8细胞增殖检测实 验以验证改良胰蛋白酶消化液对细胞间的分散效果及过度消化细胞后对细胞存活率、增殖率、 贴壁性的影响。结果显示: 在不同保存条件时, 改良胰蛋白酶消化液的pH值变化区间最小、消化能力最稳定; 与0.25%胰蛋白酶相比, 改良胰蛋白酶消化液可显著提高细胞间分散率; 与胰蛋白 酶-EDTA(0.25%)相比, 改良胰蛋白酶消化液在过度消化细胞时可明显降低细胞死亡率, 显著提高 细胞增殖率及贴壁能力。这些结果表明, 改良胰蛋白酶消化液无论在保存时效性、稳定性、消化 能力等方面均有显著提高, 且对细胞间分散效果更好, 对细胞损伤更小, 具有营养稳定实验细胞系及促进细胞系传代后快速贴壁、增殖生长的显著优势。这也为需要连续传代培养的实验细胞系、 细胞临床转化治疗、计数实验细胞系、单个细胞研究等方向提供一种更适合的细胞消化液及技术保障。
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