DCA调控NF-κB/NLRP3信号通路在急性乳腺炎发生过程中的作用机制研究
赵婷 赵楠*
该研究旨在探究脱氧胆酸(deoxycholic acid, DCA)介导NF-κB/NLRP3信号通路在急性乳 腺炎发生过程中的调控机制, 为急性乳腺炎的预防和治疗提供理论依据。通过脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)刺激人乳腺上皮细胞株DU4475建立炎症模型, 实验分为对照组、模型组、DCA低浓度组 (DCA-L, 50 μmol/L)、DCA中浓度组(DCA-M, 100 μmol/L)和DCA高浓度组(DCA-H, 200 μmol/L)。通 过细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8, CCΚ-8)筛选LPS刺激DU4475细胞产生炎症反应的最佳浓 度和DCA符合预期的浓度, 并采用CCK-8法检测各组细胞活力; 荧光染色法检测各组细胞内活性 氧(reactive oxygen species, ROS)的产生水平; Western blot检测NF-κB/NLRP3通路相关蛋白及焦亡 通路相关蛋白的表达情况; 酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)检测 各组细胞肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)、白介素-1β(interleukin-1β, IL-1β)、IL6(interleukin-6, IL-6)和IL-18(interleukin-18, IL-18)炎症因子分泌水平。研究发现, 相较于对照组, 模 型组细胞活力明显下降, TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-18炎症因子水平明显提高, 说明DU4575细胞在 50 μg/mL LPS处理下炎症模型构建成功。各DCA处理组细胞活力较模型组有明显上升趋势, ROS 产生量明显下降, IκB-α、NF-κB p65蛋白磷酸化水平下降, NLRP3、GSDMD、Caspase-1、NLRC4 等焦亡通路蛋白的表达量也有明显下降趋势。另外各组细胞TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-18等炎症 因子水平也显著下降。其中DCA-M组和DCA-H组改善细胞活力、抗氧化应激以及降低炎症水平 效果最为明显。DCA可通过抑制NF-κB信号通路的活化, 降低下游ROS产生水平, 以及TNF-α、IL1β、IL-6和IL-18等炎症因子的表达量, 起到抗炎作用。此外, NF-κB通过抑制NLRP3炎症小体的活性, 降低炎症因子的表达水平。因此, DCA对急性乳腺炎具有潜在的治疗作用。
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