circTHBS1调节miR-135a-5p/RAB1A轴对乳腺癌细胞恶性生物学行为的影响
张宏旭1 刘海旺2 王明辉1 刘汉成1 赵贺宇1 马立辉1*
该文旨在探究环状RNA血栓反应蛋白-1(circTHBS1)调节微小RNA-135a-5p(miR 135a-5p)/Rab家族蛋白1A(RAB1A)轴对乳腺癌(BC)细胞恶性生物学行为的影响。采用实时荧光定 量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测BC细胞系中circTHBS1、miR-135a-5p和RAB1A mRNA的表达情况, 筛选最佳细胞系进行后续实验; 通过RNase R处理验证circTHBS1的环状结构。将MCF-7细胞分为 Control组、sh-NC组、sh-THBS1组、sh-THBS1+inhibitor-NC组和sh-THBS1+miR-135a-5p inhibitor组。 采用qRT-PCR检测转染效率; 采用双荧光素酶报告基因法确认circTHBS1和miR-135a-5p、miR 135a-5p和RAB1A的相互作用; Western blot法检测RAB1A在MCF-7细胞中的表达情况; 采用平板克 隆法检测MCF-7细胞增殖情况; 使用流式细胞仪检测MCF-7细胞凋亡情况; 划痕实验检测MCF-7细 胞迁移情况; Transwell法检测MCF-7细胞侵袭情况; 通过裸鼠移植瘤实验检测circTHBS1对瘤组织 内BC细胞生长的影响。双荧光素酶报告基因实验结果显示, circTHBS1与miR-135a-5p、RAB1A与 miR-135a-5p均具有靶向关系。与正常人乳腺上皮细胞MCF-10A相比, circTHBS1和RAB1A在BC细 胞系中表达水平显著增加, miR-135a-5p表达水平显著下降(P<0.05); 敲低circTHBS1表达可以抑制 MCF-7细胞的增殖、迁移和侵袭, 诱导MCF-7细胞凋亡(P<0.05); 抑制miR-135a-5p表达可逆转敲 低circTHBS1表达对MCF-7细胞的增殖、迁移和侵袭的抑制作用, 并抑制MCF-7细胞凋亡(P<0.05); 通过裸鼠移植瘤实验发现, 敲低circTHBS1表达后, 裸鼠BC瘤组织质量和体积下降, 同时RAB1A表 达量下降, miR-135a-5p表达量升高(P<0.05)。circTHBS1在BC细胞中高表达, 敲低circTHBS1可以 通过调控miR-135a-5p/RAB1A轴抑制BC细胞的恶性生物学行为。
中文版
英文版