HOXA10基因对牛骨骼肌卫星细胞增殖分化的影响
张萌 张文天 杨莉 刘莉莉 吕瑞雪 付学鹏 张伟伟*
该文探讨了HOXA10基因对牛骨骼肌卫星细胞(bovine skeletal muscle satellite cells, BSMSCs)增殖分化的作用。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测增殖1、2、3天(P1、P2、P3) BSMSCs中HOXA10、PCNA基因的表达情况; 将HOXA10基因过表达质粒、干扰质粒及对照质粒 转染至BSMSCs中, 利用qRT-PCR、蛋白质免疫印迹(Western blot)实验检测过表达及干扰效果; 采 用CCK-8、EdU、流式细胞术(Flow CytoMetry, FCM)、免疫荧光、qRT-PCR和Western blot检测细 胞活力、细胞增殖、细胞周期、细胞分化以及细胞增殖和分化标志基因的mRNA及蛋白表达情 况。结果显示, 在BSMSCs增殖过程中HOXA10 mRNA水平显著升高(P<0.01, P<0.001); 与对照组 相比, 转染24 h后过表达及干扰效果显著(P<0.01, P<0.001); 过表达HOXA10基因后细胞活力增强, EdU阳性细胞比例显著增多(P<0.001), G1期细胞百分比显著降低(P<0.01), S期细胞百分比显著增 加(P<0.05), 增殖标志基因PCNA、CCND1 mRNA和蛋白的表达水平显著升高(P<0.05, P<0.01); 肌管形成水平显著降低, 分化标志基因MyoG的mRNA和蛋白表达量显著减少(P<0.01, P<0.001)。 与对照组相比, 干扰HOXA10基因后细胞活力降低, EdU阳性细胞比例显著减少(P<0.05), G1期细 胞百分比显著升高(P<0.001), S期细胞百分比显著下降(P<0.01), 增殖标志基因PCNA、CCND1 mRNA和蛋白的表达水平显著降低(P<0.05, P<0.001); 肌管形成水平显著上升, 分化标志基因 MyoG的mRNA和蛋白表达量显著减少(P<0.001)。综上, HOXA10基因促进BSMSCs增殖, 抑制其分化。
中文版
英文版