体外长期维持中性粒细胞活性的条件培养体系的建立
王彤1,2 范玉龙1,2 邵雅1,2 赵红菲1,2 刘欢1,2 张诗悦1,2 赵梓含1,2 成天然1,2 许元富1,2*
(1 中国医学科学院血液病医院(中国医学科学院血液学研究所), 血液与健康全国重点实验室, 国家血液系统疾病临床医学研究中心, 细胞生态海河实验室, 天津 300020; 2 天津医学健康研究院, 天津 301600)
摘要 :
中性粒细胞输注是一种临床辅助抗感染治疗方案, 而用于输注的中性粒细胞的体外活性维持是影响该方案实施的有效性的关键点, 目前也是相关研究的难点。因此, 该文探索间充质干细胞(mesenchymal stem cell, MSC)培养上清与一些药物分子联合使用来延缓中性粒细胞的体外衰老和维持机体免疫功能, 以期克服上述难题。通过分别采用不同培养条件(包括多种MSC培养上清、酸碱度调节培养基、影响中性粒细胞存活的多种药物分子及其组方等条件培养基)进行中性粒细胞的体外培养, 并分别检测中性粒细胞的体外寿命及生物学功能。实验结果显示, 相较于对照组(RPMI-1640培养基), MSC培养3天的培养上清可以更好地延长中性粒细胞的体外寿命, 同时也可以维持中性粒细胞的ROS释放和吞噬等杀菌功能, 两组之间具有显著性差异(P<0.01); 通过进一步实验筛选和验证, 与单纯使用MSC培养3天的培养上清相比, 使用优化后的中性粒细胞条件培养基(MSC培养上清, pH为6.0, 1 μmol/L nicotine、10 ng/mL G-CSF、0.6 mmol/L NAC、10 μmol/L DFP)显著延长了中性粒细胞的体外寿命(P<0.01)。总之, 该研究发现间充质干细胞培养上清和多种药物分子组合可以更好地维持中性粒细胞的体外活性, 这将为中性粒细胞的体外保存和输注研究提供较好的实验基础和理论依据。
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