rBTI联合奥沙利铂促进结肠癌细胞凋亡
王苗苗# 朱建芸# 李玉英*
(山西大学生物技术研究所, 化学生物学与分子工程教育部重点实验室, 生物工程山西省重点实验室, 太原 030006)
摘要 :
该文探讨了重组荞麦胰蛋白酶抑制剂(rBTI)联合奥沙利铂对结肠癌细胞HCT116和DLD-1凋亡的影响。首先通过细胞增殖实验筛选rBTI和奥沙利铂对结肠癌细胞的有效作用浓度,选取奥沙利铂存活率大于80%的浓度作为联合用药的浓度; 然后采用MTT、形态学观察、克隆形成、流式细胞术、Western blot以及qRT-PCR检测了细胞增殖、形态变化、克隆形成、凋亡情况以及Bcl-2、Bax、Cleaved Caspase-3的蛋白质及mRNA的表达情况; 进一步通过活性氧检测、分子对接以及Western blot分析了联合用药后MAPK信号通路的变化情况。结果显示, rBTI和奥沙利铂均可以抑制结肠癌细胞增殖且具有剂量依赖性; 药物联合作用于结肠癌细胞后, 以协同作用的方式显著抑制结肠癌细胞的增殖; 与单独用药组相比, 联合用药组细胞数量明显减少, 收缩变圆, 体积减小;细胞克隆形成减少, 细胞凋亡数量增加; Cleaved Caspase-3、Bax的蛋白和mRNA表达量上升, Bcl-2表达量下降; 活性氧含量上升; rBTI和奥沙利铂均可以与MAPK信号通路关键蛋白紧密结合, 并能改变关键蛋白的表达。总之, rBTI联合奥沙利铂可以促进结肠癌HCT116和DLD-1细胞凋亡。
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