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分选方式对细胞能量代谢的影响研究


邢月婷1 李艳伟2 黄莹莹2 王佳佳2 郭春2 沈鑫2 周南2 沈红英2 宋兴辉1*

(1浙江大学医学院附属妇产科医院, 杭州 310006; 2浙江大学医学院公共技术平台, 杭州 310058)
摘要 :

Seahorse XF(extracellular flux)是从能量的角度检测代谢及调控的方法, 因其实时检测 的优点, 具有非常好的应用前景, 但该技术要求目的细胞纯度高、活性好, 因此需要对原代细胞的 分选条件进行优化。该文通过免疫磁珠分选技术和流式细胞分选技术对小鼠脾脏CD4+ T细胞进 行研究, 结果发现两种分选方式纯化的CD4+ T细胞在活性氧水平上无明显差异, 相较于磁珠分选, 流式分选纯化的CD4+ T细胞线粒体膜电位、ATP合成相关的氧耗值和线粒体储备呼吸能力均呈现 下降趋势, 说明磁珠分选相较于流式分选对CD4+ T细胞能量代谢的损伤更小。为了进一步了解流 式分选的影响, 该文对分选条件进行了研究。通过Moflo AstriosEQ分选仪中不加电分选模式(SD), 加电分选模式不同偏振电压(700 V、2 400 V、5 000 V)以及同一偏振电压下不同液滴加电(35%、 70%)对HEK 293T和Jurkat进行分选, 结果发现SD组相较于加电分选模式对细胞代谢干扰较小, 加 电分选模式中5 000 V实验组对细胞代谢有显著影响。同一偏振电压条件下, 不同液滴加电实验组 均未对细胞产生显著干扰。综上, 磁珠法更适用于小鼠原代CD4+ T细胞能量代谢实验前分选预处 理。流式法用于能量代谢实验预处理时建议优先选择不加电分选模式, 选择加电分选模式时建议 使用小于2 400 V的偏振电压。该实验结果为能量代谢检测实验提供了分选方式和分选条件的数 据参考。


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