斑马鱼卵黄脂磷蛋白在早期胚胎中促进L1-ORF2诱导的EGFP报告基因表达
王文霞 王晓蝶 武崇光 Luqman ALI 耿琦 张国忠 冯旭 杨悦成 王秀芳* 吕占军*
为了探讨长散布核元件-1(long interspersed nuclear element-1, L1)在胚胎早期高表达的 分子机制, 将人L1的第二个开放阅读框(open reading frame 2, ORF2)(L1-ORF2, 该文中简称ORF2), 插入到pEGFP-C1质粒(C1)的EGFP基因下游, 生成C1-ORF2表达载体, 插入的ORF2可以影响EGFP 报告基因的表达。将C1-ORF2等表达载体注射到斑马鱼(Danio rerio)早期胚胎中, 结果表明, 在所 使用的表达载体中, 只有插入ORF2的表达载体诱导EGFP报告基因高表达。C1-ORF2表达载体诱 导的EGFP荧光强度随着胚胎的发育而显著降低。EGFP荧光报告蛋白在C1-ORF2中的表达受到组 蛋白的抑制, 0 h胚胎溶卵液(简称胚胎溶卵液)能减弱组蛋白对EGFP表达的抑制作用, 从胚胎溶卵 液中纯化的卵黄脂磷蛋白(lipovitellin, Lv)的作用强于胚胎溶卵液。凝胶阻滞实验表明, ORF2 DNA 能与胚胎溶卵液蛋白、组蛋白和Lv结合。改变组蛋白、Lv和ORF2片段三者的添加顺序, 结果证 明Lv可以结合ORF2片段和组蛋白, 从而干扰组蛋白与ORF2的结合。进一步研究发现, Lv增加了 C1-ORF2 DNA对DNase I消化的敏感性。该研究获得以下结论: Lv可以与所有检测的DNA片段结合, 但与ORF2的结合比与其他DNA片段的结合亲和力更高。Lv通过提高ORF2 DNA染色质的易接近 性, 激活ORF2诱导的斑马鱼早期胚胎EGFP基因的表达。
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