小鼠肺组织单个核细胞三种分离方法的比较研究

余倩¹ 李寅时¹ 郑旭然¹ 阿比旦·艾尼瓦尔¹ 刘览² 李静¹ 张传山^1,2 王慧^1,2*

( ¹ 新疆医科大学基础医学院, 乌鲁木齐 830017; ² 新疆医科大学第一附属医院临床医学研究院, 省部共建中亚高发病成因与防治国家重点实验室, 乌鲁木齐 830054)

摘要 :

该文综合比较了三种不同方法分离小鼠肺组织单个核细胞的效果, 并提供了一种能够有效分离小鼠肺脏全免疫细胞亚群的方法。将15只6~8周龄雌性C57BL/6小鼠随机分为三组 (n=5只/组), 分别为研磨+淋巴细胞分离液梯度离心分离组(M1组)、胶原酶IV消化+淋巴细胞分离液梯度离心分离组(M2组)和胶原酶IV消化分离组(M3组)。采用颈椎脱臼处死法处死小鼠, 摘取肺脏, 再分别采用上述三种方法制备小鼠肺脏单个核细胞悬液, 于显微镜下拍照并计数, 流式细胞术检测单个核细胞悬液中不同免疫细胞亚群的比例和数量, 采用SPSS 26.0软件进行统计分析。结果显示, M3组制备的肺单个核细胞数量显著高于M1和M2组(F=44.49, P<0.001); M2组制备的肺单个核细胞中NK(F=16.68, P<0.001)、CD4⁺ T(F=12.28, P<0.01)和B细胞(F=4.49, P<0.05)比例均显著高于M1和M3组; M3组制备的肺CD3⁺ T、MDSC、中性粒细胞和间质巨噬细胞的比例显著高于M1和M2组; M3组制备的肺NK、CD3⁺ T、CD4⁺ T、CD8⁺ T、B细胞以及髓系细胞(MDSC、中性粒细胞、DC、肺泡巨噬细胞和间质巨噬细胞)的数量均显著高于M1和M2组。应用胶原酶IV消化直接分离法制备的小鼠肺组织单个核细胞得率最高, 可有效分离到小鼠肺脏NK、T、B等淋巴细胞以及髓系来源免疫细胞亚群, 且操作过程简便。该研究为肺部相关疾病的免疫学发病机制研究提供实验基础。