端粒酶抑制剂6-硫代-2’-脱氧鸟苷诱导肿瘤细胞免疫原性死亡

该文主要探讨端粒酶抑制剂6-硫代-2’-脱氧鸟苷(6-Thio-2’-deoxyguanosine, 6-Thio-dG) 是否诱导肿瘤细胞免疫原性死亡(immunogenic cell death, ICD), 并揭示所产生的ICD的免疫应答特 征, 为利用6-Thio-dG诱导肿瘤细胞ICD开展免疫治疗提供基础。首先, 用不同浓度的6-Thio-dG处理 小鼠黑色素瘤B16-F10、结肠癌CT26、宫颈癌相关肿瘤TC-1和乳腺癌4T1细胞, 在不同时间点用显 微镜观察细胞死亡情况及形态特征; 利用乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)试剂盒定量分析 细胞死亡情况; 以检测试剂盒以及酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)分 析细胞死亡过程中免疫介质释放情况; 免疫荧光染色实验考察钙网蛋白(calreticulin, CALR)向细胞 膜的迁移定位。进一步, 建立皮下移植TC-1小鼠肿瘤模型, 当肿瘤长至4~5 mm时, 注射6-Thio-dG对 荷瘤小鼠进行治疗性干预, 通过酶联免疫斑点技术(enzyme-linked immunospot assay, ELISPOT)与流 式细胞术分析小鼠的细胞免疫应答情况; 免疫组化检测肿瘤组织中高迁移率组蛋白B1(high mobility group box protein B1, HMGB1)的释放情况。研究结果显示, 6-Thio-dG可诱导4种肿瘤细胞死亡, 死亡特征与细胞类型、药物剂量和处理时间有关; 肿瘤细胞经6-Thio-dG诱导后促进了发挥免疫刺 激作用的“发现我”信号分子三磷酸腺苷(adenosine triphosphate, ATP)和HMGB1、炎症细胞因子白 细胞介素-1β(interleukin-1β, IL-1β)的释放, 以及“吃了我”信号分子CALR在细胞膜的聚集。在肿瘤 模型中, 6-Thio-dG显著抑制了小鼠肿瘤生长, 提高了肿瘤组织中HMGB1水平, 增强了表达γ-干扰素 (interferon-γ, IFN-γ)的肿瘤抗原特异性的脾细胞应答, 降低了脾细胞中髓源性抑制细胞(myeloid derived suppressor cell, MDSC)的水平。该研究揭示了6-Thio-dG能够诱导肿瘤细胞ICD, 在杀伤肿瘤细 胞的同时, 增强了T细胞的抗肿瘤免疫应答能力, 为肿瘤免疫治疗提供了新思路。