lncRNA H19通过调控miR-146a抑制HBV复制的分子机制

该文旨在探讨lncRNA H19通过miR-146a调控乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)复制的分子机制, 为探明HBV复制的分子机制奠定基础。实时荧光定量PCR(real time quantitative polymerase chain reaction, RT-qPCR)检测在HepG2及HBV稳定复制细胞系HepG2.2.15中H19的相对表达水平, 荧光原位杂交检测HBV(–)与HBV(+)患者肝组织中H19的表达量; 分别过表达或敲低HepG2.2.15细胞中的H19、miR-146a、结构特异性flap核酸内切酶1(flap endonuclease 1, FEN1)基因, RT-qPCR分别检测H19、miR-146a及其下游靶基因白介素1受体相关激酶1抗体(interleukin-1receptor-associated kinase 1, IRAK1)/肿瘤坏死因子受体相关因子6(TNF receptor associated factor 6,TRAF6)、FEN1的表达水平, 定量PCR(quantitative polymerase chain reaction, q-PCR)检测HBV DNA拷贝数, 蛋白免疫印记法(Western blot, WB)检测FEN1蛋白表达水平, 同时, 收集10例临床HBV(+)肝组织, 5例HBV(–)肝组织检测上述指标, 采用WB、免疫组化分别检测两组标本中FEN1蛋白的表达水平。在HepG2.2.15细胞中的H19水平较对照组降低99%, 荧光原位杂交结果显示HBV(+)肝组织中H19水平较HBV(–)肝组织降低(P<0.01)。在HepG2.2.15细胞中过表达H19后, HBV DNA拷贝数较对照组降低(1.13±0.05)×105, miR-146a、FEN1表达量分别降低63%、62%; 过表达miR-146a、FEN1后, HBV DNA拷贝数分别较对照组升高(1.45±0.05)×105、(0.90±0.13)×105, H19表达量分别降低51%、54%(P<0.05)。临床标本实验结果显示, 与HBV(–)肝组织相比, RT-qPCR发现HBV(+)肝组织中H19表达量降低81%, miR-146a、FEN1表达量分别升高21.92、5.14倍, 同时WB、免疫组化均显示FEN1蛋白水平升高(P<0.05)。lncRNA H19通过下调miR-146a的表达, 作用于下游靶基因IRAK1/TRAF6, 进而降低FEN1的表达量抑制HBV DNA的复制, 为探明HBV复制的分子机制奠定了基础。

CSTR: 32200.14.cjcb.2023.11.0005