卵黄脂磷蛋白通过网格蛋白介导的内吞作用进入培养的人成纤维细胞

王晓蝶¹# 武崇光^1,2# 王文霞¹ 王瑜¹ 宋志学¹ 吉宁¹ 吴沛园¹ 王秀芳¹* 吕占军¹*

(¹河北医科大学河北省实验动物重点实验室, 遗传研究室, 石家庄 050017;²河北省邯郸市中心医院, 邯郸 056002)

摘要 :

为了探究从斑马鱼(Danio rerio)胚胎裂解液中纯化的卵黄脂磷蛋白(lipovitellin, Lv) 进入培养的人成纤维细胞的分子途径, 该研究用Sephadex G-200色谱柱结合QAE-Sephadex A50 阴离子交换色谱柱从斑马鱼0 h胚胎裂解液中分离纯化出Lv。FITC标记的Lv(FITC-Lv)预先分别与Hepes、牛组蛋白、鱼精蛋白、卵磷脂、0 h胚胎胰蛋白酶水解物或者斑马鱼胚胎裂解液孵育, 再加入至opti-MEM培养基中培养人成纤维细胞, 培养一定时间后, 用荧光倒置显微镜观察, 发现 Hepes和组蛋白可以促进Lv进入细胞。制霉菌素是陷窝介导的内吞作用(caveolae-mediated endocytosis)的抑制剂, 氯丙嗪和蔗糖是网格蛋白介导的内吞作用(clathrin-mediated endocytosis)的抑制剂, 阿米洛利是巨胞饮作用(macropinocytosis)的抑制剂。为了证实Lv进入细胞的分子途径, 在FITC标记Lv与人成纤维细胞的培养体系中, 分别加入上述抑制剂。结果发现氯丙嗪和蔗糖可以抑制Lv进入细胞。该研究获得如下结论: 纯化的斑马鱼Lv单独不能进入细胞, 在组蛋白的协同作用下, Lv通过网格蛋白介导的内吞作用进入细胞。该研究将为进一步研究Lv进入细胞发挥生物学功能奠定基础。