基于AAVS1位点构建稳定表达Cas9蛋白的非小细胞肺癌细胞系

该研究旨在利用CRISPR/Cas9介导的同源重组技术将Cas9基因序列整合入非小细胞 肺癌A549细胞基因组中的AAVS1位点, 建立稳定表达Cas9蛋白的A549单克隆细胞系。该技术避免 了Cas9基因随机整合进入基因组带来的潜在风险。通过PCR、Western blot、CCK-8、STR技术分 别检测A549单克隆细胞系的插入位点、Cas9蛋白水平、细胞增殖能力、基因编辑能力以及细胞 身份信息。上述结果显示, 在单克隆细胞系A549 Cas9-copGFP-1中Cas9基因准确插入至AAVS1安 全位点并高表达Cas9蛋白, 细胞增殖能力未发生改变。此外, 该细胞还具有良好的基因编辑能力, 细胞身份信息准确无误。总之, A549 Cas9-copGFP-1细胞可用于进一步的基因编辑, 为肺癌相关基 因的高通量筛选和功能性研究提供一种有力工具。