不可分型流感嗜血杆菌诱导14-3-3ε表达负向调控肺部炎症反应

该文旨在观察14-3-3ε在不可分型流感嗜血杆菌(NTHi)诱导人支气管上皮细胞分泌 促炎细胞因子中的作用, 并研究其作用机制。分别采用感染复数(MOI)为5、10和20的NTHi感染 BEAS-2B细胞, 实时定量PCR或Western blot检测感染前后细胞内14-3-3ε的表达情况以及酪氨酸激 酶c-Src在其中的作用。同时通过免疫共沉淀检测14-3-3ε与TLR2的结合水平。采用RNA干扰或使 细胞内过表达14-3-3ε, 免疫荧光和ELISA等方法测定其对NF-κB的活化以及培养上清中TNF-α和 IL-6浓度的影响。最后通过动物实验观察抑制14-3-3ε的活性对NTHi感染后肺部炎症反应的影响。 结果显示, NTHi感染上皮细胞后, 14-3-3ε的蛋白和mRNA水平随着MOI的递增而增高, 采用ActD 和CHX预处理细胞后, 14-3-3ε表达水平和对照组相比分别降低了71.05%和59.21%。NTHi感染 15 min后BEAS-2B细胞中c-Src磷酸化水平增高了3.63倍, 而抑制c-Src活性后14-3-3ε表达水平降低 了50.60%。免疫共沉淀结果也显示不同MOI NTHi感染后, 14-3-3ε与TLR2的结合分别增高了1.78、 4.33和6.89倍。沉默14-3-3ε表达后, NF-κB的抑制因子IκB的含量降低了75.24%, 其细胞核内p65亚 基水平增加了36.9%, TNF-α和IL-6的分泌水平分别由(269.24±16.71) pg/mL和(116.08±5.61) pg/mL 增高至(332.27±20.57) pg/mL和(172.32±9.78) pg/mL。而细胞内过表达14-3-3ε后, TNF-α和IL-1β水 平分别降至(145.34±22.16) pg/mL和(65.22±11.74) pg/mL, 以上差异均有统计学意义(P<0.05)。此 外, NTHi感染C57BL/6小鼠后肺组织中14-3-3ε mRNA表达水平也有所增高, 预先采用14-3-3ε抑制 剂R18腹腔注射后, 小鼠肺组织病理评分由(6.42±1.52)增高至(11.86±1.63), 肺泡灌洗液中TNF-α 和IL-6的含量由(186.39±16.71) pg/mL和(76.21±12.63) pg/mL增高至(258.91±32.05) pg/mL和 (151.25±23.87) pg/mL。以上结果表明, NTHi感染能诱导气道上皮细胞表达14-3-3ε, 后者能下调 TLR2/NF-κB通路活性, 最终负向调控肺部炎症反应。