MMP-9-PEX原核表达、纯化及其对结肠癌细胞侵袭能力的影响

摘要 : 用RT-PCR法扩增出基质金属蛋白酶-9 (MMP-9) C末端血红素结合蛋白样结构域(PEX)，克隆至表达载体pET32a中并转化至 E.coil BL21 (DE3)，经IPTG诱导后在约为42 kDa处发现有外源基因的表达，密度扫描显示表达蛋白含量占菌体总蛋白的50%左右。重组蛋白质 pET32a/PEX主要以包涵体形式表达，其在上清液中的含量极微。含8 mol/L尿素和10 mmol/L DTT的裂解缓冲液溶解的包涵体采用金属整合层析有效分离出目标蛋白，纯化后pET32a/PEX蛋白质的纯度大于90%。在Transwell实验中发现复性纯化后的重组蛋白质pET32a/PEX能抑制结肠癌细胞的侵袭，且呈剂量依赖性。