S100A10过表达载体构建及其对鹿茸干细胞成骨分化的影响

贾宁¹ 胡鹏飞² 陈维佳¹ 刘洪源¹ 蒋甜甜¹ 何忠梅^1* 李春义^1,2*

( ¹吉林农业大学中药材学院, 长春 130118; ²长春科技学院鹿茸科学与产品技术研究所, 长春 130600)

摘要 :

该文旨在构建及鉴定过表达梅花鹿S100A10基因的慢病毒载体, 研究S100A10对鹿茸储备间充质干细胞(reserve mesenchyme cells, RMCs)成骨分化的影响。利用PCR技术扩增S100A10的编码区, 并将其与双酶切后的慢病毒表达载体质粒PCDH连接, 构建过表达S100A10的重组质粒。包装病毒, 感染鹿茸RMCs, 用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞感染效率。用碱性磷酸酶(ALP)染色及活性定量检测细胞早期成骨分化水平, 茜素红染色检测细胞晚期成骨分化水平, qRT-PCR检测骨形态发生蛋白-2(BMP-2)、Runt相关转录因子2(Runx2)、骨钙素(OCN)的mRNA表达水平。结果显示, 该研究成功构建了S100A10过表达慢病毒载体, 过表达组 S100A10 mRNA及蛋白水平较对照组显著上升(P<0.001)。与对照组相比, 过表达组的ALP活性, 钙化结节形成量(P<0.01)以及成骨分化标志基因BMP-2、Runx2和OCN的mRNA水平均显著提高。综上所述, S100A10可促进鹿茸RMCs的成骨分化, 这为进一步研究S100A10促进鹿茸成骨的机制奠定了基础。