lncRNA TTN-AS1通过miR-138-5p/EGFR轴调控胆囊癌细胞增殖、凋亡和迁移

胆囊癌(GBC)是胆道系统常见的肿瘤, 严重威胁人类的生命健康。该研究旨在探究 长链非编码RNA(lncRNA)肌联蛋白反义RNA1(TTN-AS1)/微小RNA-138-5p(miR-138-5p)/表皮生 长因子受体(EGFR)信号轴在GBC中的分子机制。qRT-PCR检测GBC组织和细胞系中TTN-AS1、 miR-138-5p和EGFR mRNA相对表达水平, 并对它们在GBC组织中的相关性进行分析。培养GBC 细胞系GBC-SD, 分为对照(Control)组、si-NC组、si-TTN-AS1组、si-TTN-AS1+in-miR-138-5p组 和si-TTN-AS1+pc-EGFR组。qRT-PCR和Western blot检测细胞转染效率; CCK-8、EdU染色、流 式细胞术以及划痕愈合实验检测细胞增殖、凋亡和迁移情况; Western blot检测细胞增殖(PCNA)、 凋亡(Cleaved Caspase-3)和迁移(MMP-2、MMP-9)相关蛋白水平。利用体内异种移植肿瘤模型研 究TTN-AS1对GBC肿瘤生长, Ki67、PCNA阳性表达以及miR-138-5p、EGFR mRNA表达的影响。 结果显示, GBC组织和细胞系中TTN-AS1和EGFR mRNA表达均上调, miR-138-5p表达下调, 且 GBC组织中TTN-AS1水平与miR-138-5p水平呈负相关, 与EGFR mRNA水平呈正相关; miR-138- 5p水平与EGFR mRNA水平呈负相关(P<0.05)。生物信息学分析和双荧光素酶证实了miR-138-5p 与TTN-AS1或EGFR 3′UTR存在相互作用, 且RNA下拉实验证实了TTN-AS1与miR-138-5p结合; qRT-PCR和Western blot证明TTN-AS1可能通过miR-138-5p调控EGFR表达(P<0.05)。敲低TTNAS1可显著抑制GBC-SD细胞增殖和迁移, 诱导细胞凋亡(P<0.05); 同时下调PCNA、MMP-2和 MMP-9蛋白水平, 上调Cleaved Caspase-3蛋白水平(P<0.05)。抑制miR-138-5p或过表达EGFR可部 分逆转TTN-AS1敲低对GBC-SD细胞恶性行为的影响。体内实验证实, 敲低TTN-AS1可抑制肿瘤 生长, 同时上调miR-138-5p水平, 下调EGFR mRNA和Ki67、PCNA阳性表达水平(P<0.05)。总之, TTN-AS1可能在GBC的发生和发展中发挥促癌作用, 且其可能是通过调节miR-138-5p/EGFR信号 轴实现的。