USP1通过调控E2F1对膀胱癌细胞增殖和周期的作用研究

该文探讨了泛素特异蛋白酶1(USP1)对膀胱癌细胞增殖和周期等生物学行为的作用, 并进一步探索其作用机制。通过分子克隆技术构建膀胱癌T24细胞USP1过表达细胞株; CRISPRCas9技术构建膀胱癌UMUC3细胞USP1敲除细胞株; CCK8和克隆形成实验检测细胞增殖和克隆 形成能力; 划痕实验检测细胞迁移; PI染色流式细胞术检测细胞周期; 转录组测序检测USP1敲除 后基因表达差异及其相关的功能与信号通路; 双荧光素酶报告基因检测USP1对信号通路的影响, 并通过免疫印迹技术进行验证。结果显示, USP1过表达可以促进膀胱癌细胞增殖, 敲除后显著抑 制了膀胱癌细胞的增殖和克隆形成及迁移能力, 促进S期细胞阻滞。转录组测序结果显示, USP1 敲除后差异表达基因共4 522个, 其中上调基因2 078个, 下调基因2 444个。KEGG分析结果显示, 这些基因涉及多个方面, 包括细胞周期调控、细胞信号转导、转录翻译、蛋白折叠降解、自噬凋 亡等。Hallmark数据库分析结果显示, 差异表达基因与E2F信号通路密切相关。双荧光素酶报告 基因显示, USP1过表达后, E2F1信号通路明显上调并且呈剂量依赖式, 免疫印迹结果也显示USP1 敲除后E2F1蛋白水平下调明显。该研究得出, USP1通过E2F1调控膀胱癌细胞增殖和周期, 从而促 进膀胱癌进展。