miR9-2在免疫细胞发育功能中的初步研究

该研究利用CRISPR/Cas9技术构建miR9-2(microRNA9-2)敲除小鼠, 并通过流式细胞术初 步鉴定miR9-2对B细胞和T细胞的影响。通过设计成熟miR9-2(mature miR9-2)序列左右两侧sgRNA1和 sgRNA2, 并连接pX459线性化载体。将体外转录后的单链sgRNA1、sgRNA2以及Cas9蛋白共同注射到 受精卵的雄原核中, 以获得miR9-2敲除小鼠。通过流式分析, 观察WT(Wild-type)小鼠和杂合子(miR9-2+/− ) 小鼠相关免疫细胞的百分比和细胞数的变化情况。该研究成功构建miR9-2敲除小鼠杂合子模型。流 式数据分析表明, 与WT小鼠相比, 杂合子小鼠脾脏中的总B细胞、CD4+ 和CD8+ T细胞数均显著下降; 与WT小鼠相比, 杂合子小鼠骨髓中总B细胞数百分比和细胞数均显著下降; 未成熟B(immature B)细 胞、祖前B(pro-pre B)细胞、前B(pre B)细胞的百分比和其对应细胞数均显著下降, 而成熟B(mature B) 细胞的百分比显著上升, 其细胞数则变化不大。骨髓中, miR9-2+/− 小鼠的CD4+ 和CD8+ T细胞百分比上 升, 而其对应细胞数则变化不大。在胸腺中, 杂合子小鼠的DN(double negative)细胞百分比上升, 其细 胞数显著下降; DP(double positive)细胞百分比和细胞数均显著下降; CD4+ 和CD8+ T细胞百分比均显著 上升, 其细胞数均显著下降。该研究表明, miR9-2的敲除对骨髓中B细胞的发育、胸腺中T细胞的发育 以及脾脏中B细胞和T细胞的成熟发育造成了一定程度的影响。