全反式维甲酸通过激活BMP2的表达抑制中性粒细胞胞外诱捕网的形成

该研究探讨了全反式维甲酸(all-trans retinoic acid, ATRA)对中性粒细胞胞外诱捕网(neutrophil extracellular traps, NETs)释放的调节作用及其可能的机制。体外提取C57BL/6小鼠的中性粒细 胞, 给予ATRA处理, 佛波酯(phorbol 12-myristate 13-acetate, PMA)诱导NETs产生, 免疫荧光检测NETs 的髓过氧化物酶(myeloperoxidase, MPO)和脱氧核糖核酸(deoxyribonucleic acid, DNA)的共定位, Sytox Green荧光定量细胞外DNA的数量, 蛋白质印迹法检测MPO蛋白表达, ELISA检测细胞上清中瓜氨酸 化组蛋白(citrullinated histone 3, H3Cit)含量。该研究利用RNA-seq筛选了对ATRA易感的基因, 并通过 qRT-PCR验证相关差异基因(Arg1、Camkk1、BMP2等)的mRNA表达情况。为了研究ATRA的靶基因 BMP2对NETs发生的影响, 该研究用BMP2的抑制剂(LDN193189)处理中性粒细胞, 再通过Sytox Green 荧光实验验证BMP2对NETs形成的作用。结果显示: ATRA处理后的NETs的MPO和DNA共定位减少, MPO蛋白表达水平降低, 细胞上清中H3Cit含量显著低于PMA组(P<0.000 1), Sytox Green定量NETs荧 光值显著低于PMA组(P<0.01), ATRA以剂量依赖性方式抑制NETs生成; RNA-seq结果显示456个基因 的表达发生了变化, 其中274个基因上调, 182个基因下调, qRT-PCR结果表明, 与PMA组相比, ATRA预 处理组中的BMP2、Arg1、Camkk1、Abca1、GSS等基因发生上调, 与RNA-seq结果一致; LDN193189 处理后, Sytox Green定量NETs荧光值显著高于PMA组(P<0.000 1)。综上, ATRA能够抑制NETs的释放, 其机制可能是通过激活BMP2的表达从而抑制NETs形成的。