冻存后脐血NK细胞的培养及CAR-NK的功能初探

张月琴^1,2 蒙露³ 赵日⁴ 毛娟⁵ 刘琴¹ 周丹³ 刘洋¹ 邹强³*

(¹成都医学院药学院, 成都 610500; ²成都优赛诺生物科技有限公司, 成都 610200; ³成都医学院基础医学院, 成都 610500; ⁴西南交通大学医学院, 成都 610031; ⁵川北医学院, 南充 637007)

摘要 :

该研究优化冻存后脐血NK细胞的培养条件, 构建了靶向CD19的CAR-NK细胞, 并探究了CD19-CAR-NK对CD19+ B细胞淋巴瘤的杀伤作用。首先将冻存的脐血单个核细胞复苏并静置 18 h, 通过CD56磁珠纯化NK细胞, 使其在CBMC中的比例从13.8%提高至96.6%。然后比较使用不同细胞因子及其组合对NK细胞增殖、分化、凋亡及功能的影响, 发现IL-2和IL-15均能活化NK细胞, 但IL-2培养时NK细胞增殖优于IL-15(P<0.05), IL-2+15下CD56dim NK亚群占比[(74.33±5.03)%]最多, 凋亡[(4.6±0.14)%]最少, 累计增殖(62.67±3.21)倍, 显著优于其他细胞因子组合(P<0.05)。该研究使用PDK1抑制剂BX795提高CAR-19慢病毒载体对NK细胞的转导效率, 发现6 μmol/L BX795可将病毒转导效率提高3.6倍, 且在此浓度下病毒转导效率[(36.4±1.91)%]最大。最后在体外验证CD19- CAR-NK对CD19+ 肿瘤细胞的杀伤能力, 发现CD19-CAR-NK可增强NK细胞对Nalm6的杀伤作用, 但不影响NK对Nalm6-CD19KO的杀伤。综上所述, 该研究得出IL-2+15是冻存后脐血NK细胞的最佳细胞因子组合, 被CAR修饰的NK细胞能特异性识别CD19抗原并杀伤CD19+ 肿瘤细胞。