长效抑制TIM-3表达增强ROR1嵌合抗原受体修饰的T细胞的抗肿瘤免疫应答
夏玉龙1 蒋继宏2 金昕1 师春青1 张小冬1 蒋金洲1 宋启斌3* 陈瑞4* 吴炯1*
（1苏州恒康生命科学有限公司研发部, 苏州 215000; 2江苏师范大学生命科学学院, 徐州 221116; 3武汉大学人民医院肿瘤中心, 武汉 430060; 4首都医科大学公共卫生学院, 北京 100069)
摘要 :
该文探讨了T细胞免疫球蛋白黏蛋白3(T cell immunoglobulin and mucin domain-containing protein 3, TIM-3)基因沉默对靶向ROR1的嵌合抗原受体(ROR1-CAR)修饰的T细胞增殖和抗 肿瘤免疫应答的影响及其作用机制。通过短发夹RNA(short hairpin RNA, shRNA)基因沉默技术长 效抑制TIM-3在ROR1-CAR T细胞中的表达, 采用qRT-PCR和Western blot实验检测TIM-3在mRNA 和蛋白水平的表达情况; 采用ELISA实验验证TIM-3基因沉默的ROR1-CAR T细胞对靶细胞的杀伤 能力的影响; 流式细胞检测进一步评估抑制TIM-3表达对ROR1-CAR T细胞的靶向杀伤和抗原依赖 性的增殖能力的影响。结果显示, shRNA可显著抑制TIM-3在ROR1-CAR T细胞中的表达, 但不影 响ROR1-CAR T细胞的百分比和增殖活性; 通过检测发现ROR1阳性的人结肠癌细胞系SW620分泌 高水平的TIM-3配体—半乳凝素9(Galectin-9), 该配体可直接作用于ROR1-CAR T细胞而发挥免 疫负调控作用。另外, 长效抑制TIM-3的表达促进了ROR1-CAR T细胞的抗原依赖性的细胞因子释 放和增殖。总之, 消除ROR1-CAR T细胞表面的TIM-3与肿瘤细胞来源的Galectin-9之间的相互作 用可有效增强ROR1-CAR T细胞的抗肿瘤活性。
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